| 研究課題/領域番号 |
13680859
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
神経化学・神経薬理学
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| 研究機関 | 埼玉医科大学 |
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研究代表者 |
斎藤 祐見子 (斉藤 祐見子) 埼玉医科大学, 医学部, 講師 (00215568)
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| 研究期間 (年度) |
2001 – 2002
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| 研究課題ステータス |
完了 (2002年度)
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| 配分額 *注記 |
3,600千円 (直接経費: 3,600千円)
2002年度: 1,400千円 (直接経費: 1,400千円)
2001年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
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| キーワード | 摂食 / ペプチド / 受容体 / カルシウム / 神経ペプチド / Gタンパク質 / イーストツーハイブリッド |
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| 研究概要 |
SLC_<-1>は摂食にとって非常に重要な役割を果たすことが最近になって知られてきた受容体である。本研究により得られた新たな知見は3点ある.
1.CHO細胞やHEK_<293>細胞へ外来性にMCH(メラニン凝集ホルモン)受容体SLC_<-1>を強制発現させるとGi/o及びGqへのカップリングが認められる。しかしながら、SLC_<-1>の機能的側面をさらに深く解析するためには本受容体を強制的ではなく、内在的に発現するモデル系を得ることが重要である。多数の細胞株をRT-PCR及びノザンブロットでスクリーニングしたところ、SLC_<-1>内在性高発現株を3株見出した。そのうちのひとつ、ヒトメラノーマ細胞SK-MEL_<-37>細胞においては、MCHはフォルスコリンで誘導させたcAMPを減少させ、さらにMAP kinaseを活性化することがわかった。この活性は百日咳毒素感受性のため、本細胞に発現するSLC_<-1>はGi/oにカップリングする。しかし、強制発現系における結果とは異なり、SK-MEL_<-37>細胞においてはMCHによって細胞内カルシウム濃度の上昇はカルシウムイメージング法によってもリアルタイム測定法によっても認められなかった。これはSLC_<-1>が細胞株において機能的に内在性高発現することを示した初めての結果である。この成果はBiochem. Biophys. Res. Commun.に発表した.
2.SLC_<-1>のsite-directed mutagenesisにより受容体変異体を作成し、細胞にトランスフェクション後、機能アッセイを行った。その結果、グリコシレーションに関係する細胞外アスパラギン残基(N_<23>)が受容体の膜移行及びcalcium influxを経る情報伝達経路に特に重要な役割を果たすことが初めて明らかとなった。この成果はFEBS lettersに発表した。
3.yeast-two-hybrid法及びバクテリアを用いた発現系によりSLC_<-1> C末端部分と結合する因子を脳由来ライブラリーから探索した.その結果、既知分子3つ、新規の脳特異的発現分子1つの単離に成功した。既知分子のひとつは哺乳類細胞系においてもSLC_<-1>との結合が確認され、受容体の機能そのものにも影響を及ぼすことが考えられる。
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