telomeric repeat elongation assayの開発

• 研究課題/領域番号: 13770093
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 人体病理学
• 研究機関: 岩手医科大学
• 研究代表者: 前沢 千早 岩手医科大学, 医学部, 講師 (10326647)
• 研究期間 (年度): 2001 – 2002
• 研究課題ステータス: 完了 (2002年度)
• 配分額: 2,400千円 (直接経費: 2,400千円); 2002年度: 600千円 (直接経費: 600千円); 2001年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
• キーワード: TRE / テロメア / 相互作用 / がん / 分子標的治療 / TRAP

研究概要

表面プラズモン共鳴現象を応用した,生体内分子間相互作用解析装置を用いて,定量的テロメラーゼ活性の評価法telomeric repeatelongation (TRE) assay を開発した.TRE assayはBio sensor chipと呼ばれる金薄膜のコートされた1cm^2程のチップ上に,G-quartet構造を持った50bp程のDNA断片を固定化する.次に,テロメラーゼ抽出物ををロードし,結合・伸長・解離・再生を行う.得られたセンサーグラムから伸長の結果生じた重量変化をe-valueとした.本法の特徴は (1)PCR法を用いていないので,従来のTRAP法で生じていたPCR inhibitorの混入によるfalse-negativeがない
(2)塩基の伸長速度を直接計測できる
(3)電気泳動を必要としないone-step操作なので,ピペット操作や泳動操作の際に生じる誤差がない.
(4)デンシトメータあるいはELISAによる計測の必要がない.
(5)短時間にnon-labelingで解析可能である.
などの利点があった.
TRE assayはnon-labelingで,これまでのTRAP法による阻害効果の検討時間を1/50程に短縮する事が可能であり,本法を用いたテロメラーゼ阻害物質のスクリーニングが可能である.TRE assayは新規テロメラーゼ阻害剤の発見に効果を発揮し,テロメラーゼを標的とした分子標的治療法の開発に大いに貢献すると思われた.

研究成果

• [文献書誌] Maesawa C, Inaba T, Sato H, Iijima S, Ishida K, Terashima M, Sato R, et al.: "A rapid biosensor chip assay for measuring of telomerase activity using surface plasmon resonance"Nucleic Acids Res. 31. E4-E4 (2003)
• [文献書誌] Nakatani K, Hagihara S, Sando S, Sakamoto S, Yamaguchi K, Maesawa C, Saito I: "Induction of a remarkable conformational change in a human telomeric sequence by the binding of naphthyridine dimer : inhibition of the elongation of a telomeric repeat by telomerase"J Am Chem Soc. 125. 662-663 (2003)
• [文献書誌] Wada K, Maesawa C, Satoh T, Akasaka T, Masuda T: "A case of primary cutaneous CD30+ T-cell lymphoproliferative disorder with features of granulomatous slack skin disease"Br J Dermatol. 147. 998-1002 (2002)
• [文献書誌] Tarusawa M, Yashima A, Endo M, Maesawa C: "Quantitative assessment of minimal residual disease in childhood lymphoid malignancies using an allele-specific oligonucleotide real-time quantitative polymerase chain reaction"Int J Hematol. 75. 166-173 (2002)
• [文献書誌] Mesawa C: "Esophageal extraskeletal Ewing's sarcoma"Hum Pathol. 33・1. 130-132 (2002)
• [文献書誌] Tarusawa M: "Quantitative assessment of minimal residual disease in childhood lymphoid malignancies using an allele-specific oligonucleotide real-time quantitative polymerase chain reaction"Int Hematol. 75・2. 166-173 (2002)
• [文献書誌] Ikeda K: "Chemoradiotherapy followed by surgery for thoracic esophaqeal cancer potentially or actually involving adjacent organs"Dis Esophagus. 14・3-4. 197-201 (2001)
• [文献書誌] Iijima S: "Gastrointestinal stromal tumor of the esophagus : significance of immunohistochemical and genetic analyses of the c-kit gene"Eur J Gastroenterol Hepatol. 14(In press). (2002)