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動脈硬化発症に関与する脂質過酸化物の同定

研究課題

研究課題/領域番号 13770222
研究種目

若手研究(B)

配分区分補助金
研究分野 法医学
研究機関神戸大学

研究代表者

浅野 水辺  神戸大学, 大学院・医学系研究科, 助手 (90283879)

研究期間 (年度) 2001 – 2002
研究課題ステータス 完了 (2002年度)
配分額 *注記
2,300千円 (直接経費: 2,300千円)
2002年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
2001年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
キーワードオキシステロール / 過酸化脂質 / 動脈硬化 / コレステロール過酸化物 / HPLC / 化学発光検出法
研究概要

剖検時にヒト腹部大動脈より、正常または粥状硬化病変を有する血管壁を採取した。これよりFolch法により粗脂質を抽出し、さらに固相抽出法を用いてコレステロール画分を精製分取した。
このコレステロール画分を化学発光-高速液体クロマトグラフ(CL-HPLC)法にて分析したところ、粥状硬化病変(n=15)からはコレステロール過酸化物である7-hydroperoxycholesterolの2種の異性体(7α-,7β-hydroperoxycholesterol)が検出された。5α-hydroperoxycholesterolは検出されなかった。内部標準法にて定量したところ、7α-,7β-hydroperoxycholesterolはそれぞれ2.3±1.0 nmol/g、4.9±2.2nmol/gであった。一方、正常血管壁(n=15)からはいずれのコレステロール過酸化物も検出されなかった。
紫外部吸収-高速液体クロマトグラフ(UV-HPLC)法にてコレステロール酸化物である7-ketocholesterol,7α-,7β-hydroxycholesterolの定量分析を試みた。カラムはODS-2(150×4.0mm)を、移動相にはアセトニトリル/メタノール/水(46:45:9)を流速0.7ml/minで用いた。この条件で3種のコレステロール酸化物は分離可能であり、β-sitosterolを用いた内部標準法にてnmolレベルで定量可能であった。吸収波長210nmでは3種のコレステロール酸化物が同時に検出されたが、245nmでは7-ketocholesterolのみが特異的に検出された。吸収波長245nmの方が7-ketocholesterolに関して約2.5倍感度が良かった。よって、7-ketocholesterolは吸収波長245nmで測定した。分析した粥状硬化病変(n=15)の7-ketocholesterolは22.0±9.0nmol/gであった。正常血管壁からは7-ketocholesterolを検出しなかった。粥状硬化病変、正常血管壁のいずれからも7α-,7β-hydroxycholesterolは検出されなかった。

報告書

(2件)
  • 2002 実績報告書
  • 2001 実績報告書

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公開日: 2001-04-01   更新日: 2016-04-21  

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