| 研究課題/領域番号 |
13770239
|
|---|
| 研究種目 |
若手研究(B)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 研究分野 |
内科学一般
|
|---|
| 研究機関 | 慶應義塾大学 |
|---|
研究代表者 |
野島 崇樹 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (30327514)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2001 – 2002
|
| 研究課題ステータス |
完了 (2002年度)
|
| 配分額 *注記 |
1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
2002年度: 600千円 (直接経費: 600千円)
2001年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
|
|---|
| キーワード | 関節リウマチ / 自己抗体 / ヒトDNA helicase V / FUSE結合蛋白 / 自己抗原 / 慢性関節リウマチ / サイトケラチン-18 |
|---|
| 研究概要 |
ヒト末梢血リンパ球cDNAをテンプレートに用いて、癌遺伝子c-mycの調節因子であるfar up-stream element binding protein(FUSE結合蛋白=ヒトDNA helicase V)の全長cDNAをnested PCRを用いて分離に成功した。(シークエンスを行い、DNA配列を確認済)
FUSE結合蛋白の抗原エピトープ解析を行うため、まずはKH-domain(DNA結合部位)の精製を目的として、86-457アミノ酸残基に相当する部分cDNAをnested PCRにより獲得し、発現ベクター(プラスミドpTriex)にサブクローニングして、大腸菌に発現させたHisTag付き蛋白(KH蛋白)を獲得した。TALON(コバルトレジンカラム)を用いてKH蛋白を精製し、免疫ブロットの抗原として用いた。
関節リウマチ(RA)72例の患者血清を希釈し(抗大腸菌抗体吸収済)、患者血清中のIgGと、精製KH蛋白との抗原反応性を検討したところ、72例中5例(7%)、にKH蛋白との反応性が確認された。
(FUSE結合蛋白の抗原エピトープ解析を進めるにあたり、N末、C末解析用の精製蛋白の発現を試みるも、いまだ成功せず、細かいエピトープ解析ができていない状況である。KH蛋白に関しては、大量精製を行い、ELISAを行うことでRA活動性との関連や、他の膠原病での抗体陽性率について検討を行っていく予定である。)
|
