| 研究課題/領域番号 |
13770313
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| 研究種目 |
若手研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
呼吸器内科学
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| 研究機関 | 近畿大学 |
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研究代表者 |
仲谷 達也 近畿大学, 医学部, 助手 (40319661)
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| 研究期間 (年度) |
2001 – 2002
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| 研究課題ステータス |
完了 (2002年度)
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| 配分額 *注記 |
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
2002年度: 600千円 (直接経費: 600千円)
2001年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
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| キーワード | 肺筋線維芽細胞 / デコリン過剰発現 / デコリンノックダウン / α-平滑筋アクチン / 筋線維芽細胞 / デコリン / p21 / 制止期 |
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| 研究概要 |
Decorinの発現は細胞の増殖や静止と密接に関係している。昨年度、我々はヒト肺筋線維芽細胞株MRC-5を用いて接触阻害による静止期と血清除去による静止期を作製し、両者のDecorin発現量の差が、細胞の活性化の指標となるα-smooth muscle actin(SMA)発現量に影響することを示唆した。今回このことを裏付けるためにMRC-5細胞にDecorinを導入し、過剰発現した細胞と反対にノックダウンした細胞よりα-SMA mRNA発現量を比較した。
[方法]Decorin遺伝子(cloning into pCEP4 Vector)をMRC-5細胞に導入し過剰発現させ、6日後に回収した。また、DecorinのRNA interference用 small interfering RNAを用いて、血清を除去したMRC-5細胞に3日ごとに3回導入しノックダウンさせ、10日後に回収した。それぞれQuantitative RT-PCRによりDecorin、α-SMA mRNA発現量を比較した。
[結果]Decorin遺伝子を過剰発現させた細胞はコントロールに比べ、Decorin mRNAは30-300倍に増加し、α-SMA mRNAは約0.7倍に減少した。Decorin遺伝子をノックダウンさせた細胞はコントロールに比べDecorin mRNAは0.2倍に減少し、α-SMA mRNAは約1.3-4倍に増加した。
[考察]Decorin遺伝子のMRC-5細胞への過剰発現によってα-SMA mRNAの減少が観察され、また、逆にDecorin遺伝子のノックダウンによってα-SMA mRNAの増加が得られた。以上より、Decorin遺伝子は、MRC-5細胞のα-SMA mRNAの発現量を抑制することが明らかになったと考えられる。すなわち、Decorinがヒト肺筋線維芽細胞の活性化を抑制し、肺線維化の抑制因子の一つであることが示唆された。
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