膵癌に対する神経栄養因子を用いた新しい遺伝子治療

• 研究課題/領域番号: 13770707
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 消化器外科学
• 研究機関: 杏林大学
• 研究代表者: 徳原 真 杏林大, 医学部, 助手 (40333033)
• 研究期間 (年度): 2001 – 2002
• 研究課題ステータス: 完了 (2002年度)
• 配分額: 2,600千円 (直接経費: 2,600千円); 2002年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円); 2001年度: 1,400千円 (直接経費: 1,400千円)
• キーワード: 膵癌 / 神経栄養因子 / 遺伝子治療 / PEDF

研究概要

神経栄養因子であるPEDF(human pigment epithelium-derived factor)のin vitroにおける浸潤・増殖抑制作用を確認する目的でPEDF遺伝子の細胞への導入を行った。PEDF遺伝子とレポーター遺伝子であるEFGP(enhanced green fluorescence protein)を組み込んだプラスミドを、膵癌細胞株であるPanc-1,MiaPaCa-2,BxPC-3,AsPC-1にトランスフェクションを行った。リン酸カルシウム法では各細胞ともに10-20%程度の細胞に発現が認められず効率が悪いため、リポフェクション法を用いて遺伝子導入を行った。トランスフェクション後、EGFPをマーカーにFACS(florescence-activated cell sorting)を行い、遺伝子導入された細胞のみを選別した。現在、膵癌細胞株のうち低分化腺癌のPanc-1と未分化腺癌のMiaPaCa-2でPEDF遺伝子が導入されたstable cell lineを確立することができた。これらのstable cell lineとcontrolと細胞のgrowth curveにより細胞の増殖能を比較した。その結果、Panc-1においてはPEDF導入群とcontrolでは差が認められなかったが、MiaPaCa-2では、有意にPEDF群で増殖の抑制が認められた。現在、BrdUを用いたELISA法にて増殖抑制についての再検討を行っており、同時にChemotaxis chamberを使ったinvasion assayを施行しており、浸潤能についても検討している。