細胞成長因子がヒト歯髄細胞の接着分子発現におよぼす影響

• 研究課題/領域番号: 13771149
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 保存治療系歯学
• 研究機関: 愛知学院大学
• 研究代表者: 中田 和彦 愛知学院大学, 歯学部, 講師 (70261013)
• 研究期間 (年度): 2001 – 2002
• 研究課題ステータス: 完了 (2002年度)
• 配分額: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円); 2002年度: 800千円 (直接経費: 800千円); 2001年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
• キーワード: 歯髄 / 接着分子 / Platelet endothelial cellular adhesion molecule-1 (PECAM-1) / 細胞培養 / 細胞成長因子 / basic fibroblast growth factor (bFGF) / イムノブロット法 / Platelet endotherial cellular adhesion molecule-1(PECAM-1) / basic fibroblast growth factor(bFGF) / RT-PCR法

研究概要

ヒト歯髄細胞(DP細胞)の接着分子Platelet endothelial cellular adhesion molecule-1(PECAM-1)発現におよぼす細胞成長因子EGFおよびbFGFの影響について、高感度なイムノブロット分析法を用いて検索した。
臨床分離したDP細胞をコンフルエントに達するまで培養した後、代表的な細胞成長因子である上皮増殖因子(epidermal growth factor : EGF)および線維芽細胞増殖因子(basic fibroblast growth factor : bFGF)を所定の濃度範囲(0.8,4,20,100ng/mL)で48時間作用させた。所定時間が経過した後、界面活性剤(トリトンX-100など)を含む抽出用バッファーを用いて細胞膜画分を回収し、イムノブロット法のサンプルとした。各サンプルのタンパク濃度を測定後、タンパク量が10μg/レーンとなるようにしてSDS-PAGEを行った。ニトロセルロースメンブレンを用いて、タンパクのブロッティングを行った後、ブロッキンクを行った。ついで、抗ヒトPECAM-11次抗体およびHRP標識2次抗体をそれぞれ反応させて、ECLウエスタンブロッティング検出システムとX線フィルムを使用して発光シグナルを検出した。
その結果、次のような知見を得た。
(1)DP細胞は、無血清培地条件下において、無刺激の場合、PECAM-1をタンパクレベルで発現していなかった。
(2)DP細胞のPECAM-1タンパクの発現は、EGFおよびbFGF添加によって、まったく誘導されなかった。
以上のことから、DP細胞は、血管内皮細胞や白血球などでみられるような接着分子PECAM-1の発現を示さないことが明らかとなった。