ヒト歯根膜組織に特異的に発現する遺伝子の研究

• 研究課題/領域番号: 13771304
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 歯周治療系歯学
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 野崎 剛徳 大阪大学, 大学院・歯学研究科, 助手 (30263304)
• 研究期間 (年度): 2001 – 2002
• 研究課題ステータス: 完了 (2002年度)
• 配分額: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円); 2002年度: 500千円 (直接経費: 500千円); 2001年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
• キーワード: 歯根膜組織 / mRNA / 3'末端cDNAライブラリ / 遺伝子発現頻度 / gene expression profile / 細胞外マトリックス / 硬組織形成 / 歯周組織再生 / cDNAライブラリ / 歯根膜由来細胞

研究概要

1.歯根膜組織gene expression profile解析
平成13年度の研究で歯根膜組織由来mRNAを基に作製した3'末端cDNAライブラリから約1,700個のクローンを無作為に選出し、DNAシークエンシングを行って各々の塩基配列を決定した。そしてBLASTによる遺伝子検索を行い、それぞれの遺伝子の機能及びその出現頻度を順に列記した歯根膜gene expression profileを作成、解析することにより、in vivoの歯根膜組織において如何なる遺伝子が如何なる頻度で発現しているのかを明らかにした。
2.歯根膜組織に特異的に発現する遺伝子の同定
上述の歯根膜gene expression profileの解析結果と他の組織・細胞のgene expression profileを比較検討することによって、ヒト歯根膜において特徴的な発現が認められる一方で他の組織では発現が殆ど認められない3'末端配列を選出するとともに、これらの遺伝子の全長の塩基配列クローニングを行った。そして得られた全長cDNA塩基配列にてBLASTによる遺伝子相同性検索を行った結果、新規の細胞外マトリックスタンパク、BMP-2増殖因子のアンタゴニストなど、複数の興味深い遺伝子が単離同定された。さらに、これらの遺伝子の各々に特異的なPCRプライマーを設計合成し、培養ヒト歯根膜由来細胞に対してin vivoで分化誘導を行った際に認められる遺伝子発現パターンを、RT-PCRにて解析した。その結果、ヒト歯根膜由来細胞が分化誘導を受けて硬組織形成能を示す際に、その転写が誘導あるいは抑制される遺伝子が存在することが明らかとなった。すなわち歯根膜組織の増殖・分化機能への関与が示唆され、歯周組織の再生に際して重要な役割を果たしていると考えられる複数の遺伝子の単離・同定に成功した。