| 研究課題/領域番号 |
13832001
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究機関 | 東北大学 |
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研究代表者 |
安部 まゆみ 東北大学, 加齢医学研究所, 助手 (80271980)
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| 研究分担者 |
佐藤 靖史 東北大学, 加齢医学研究所, 教授 (50178779)
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| 研究期間 (年度) |
2001 – 2002
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| 研究課題ステータス |
完了 (2002年度)
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| 配分額 *注記 |
1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
2002年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
2001年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
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| キーワード | VEZF1 / 血管内皮細胞 / 転写因子 / 血管形成 / 血管新生 / ES細胞 / 分化 / VEZF / 内皮細胞 / 胚性幹細胞 / 血管内皮前駆細胞 |
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| 研究概要 |
1.VEZF1cDNA-IRES-EGFPのフラグメントをES細胞用発現ベクター、pHPCAGに挿入して、マウスVEZF1センス、アンチセンスcDNA発現ベクタ-(VEZF-S, VEZF-AS)を作製し、スーパートランスフェクション法でES細胞株(MG1.19)に導入した。
2.未分化状態を維持した系(LIF存在下でゼラチン上に培養)でのMG1.19には既にVEZF1が発現していることがRT-PCR、ウエスターンブロットで確認された。
3.我々は当初コントロールとしてIRES/EGFPをES細胞用発現ベクターpHPCAGに導入して作製したものをMockとして用いたが、EGFPの発現が見られなかったため、EGFPの部分のみを導入したものをMockとして用いた。
4.EGFPの発現はMock、VEZF1-S、VEZF1-ASの各細胞株で確認されたが、RT-PCR、ウエスタンブロットを用いて検討したVEZF1のmRNAならびに蛋白の発現レベルではこれら3種の細胞株に差異はなかった。
5.さらにLIF非存在下でOP9上に培養する分化系に移しても、内皮前駆細胞のマーカーの一つであるVEGFR2の発現も、これら3群に有意の差は見られなかった。
6.我々はVEZF1が血管内皮細胞の増殖・遊走・ネットワーク形成に重要であることをin vitro並びにin vivoの系で見出したが(投稿中)、VEZF1が内皮細胞の分化にも関与するか否かについては、ASベクターによるVEZF1の発現抑制の失敗により、確認できなかった。
7.今後はsiRNAによる発現抑制を試みる予定である。
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