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増殖性を獲得した血管平滑筋細胞の収縮性の検討:再構成血管平滑筋標本を用いた検討

研究課題

研究課題/領域番号 13832006
研究種目

基盤研究(C)

配分区分補助金
応募区分一般
研究機関九州大学

研究代表者

西村 淳二  九州大学, 大学院・医学研究院, 助教授 (90237727)

研究分担者 平野 勝也  九州大学, 大学院・医学研究院, 講師 (80291516)
研究期間 (年度) 2001 – 2002
研究課題ステータス 完了 (2002年度)
配分額 *注記
3,700千円 (直接経費: 3,700千円)
2002年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
2001年度: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
キーワード血管平滑筋 / 収縮 / 細胞培養 / コラーゲンゲル / ウイルスベクター / 低分子量G蛋白
研究概要

本研究の目的は、増殖性を獲得した血管平滑筋細胞の収縮性変化の分子機構を明らかにすること、また、増殖性を獲得した血管平滑筋細胞の収縮性が、培養環境(温度、ホルモン、増殖因子の有無、shear stress、各種遺伝子導入)によりどの様に変化するのかを明らかにすることである。本年度の研究により以下の様なことが明らかになった。
1、バキュロウイルスにほ乳動物のプロモーターを挿入し、その下流に種々の遺伝子を組み込んだベクターを作製することに成功した(この実験は、本学の遺伝情報研究施設で行った。)このウイルスを用いることにより、哺乳動物細胞(NIH3T3,ブタ気道平滑筋、ブタ冠動脈平滑筋、ヒト前立腺細胞)に遺伝子導入できることができたが、細胞傷害性が強く、その細胞傷害性の原因を解明することに、時間を要した。この細胞傷害性は、Sf9細胞(昆虫細胞;バキュロウイルスの宿主細胞)に由来する細胞断片に由来することが判明した。この細胞断片を遠心およびフィルターにより取り除くことにより、細胞傷害性なく、高効率に遺伝子導入することに成功した。
2、このベクターを豚冠動脈培養平滑筋細胞に感染、rhoAを発現させた豚冠動脈培養平滑筋細胞を用いて再構成血管標本を作製したところコントロールの2-3倍の収縮力を示した。しかしながら、dominant negative formのrhoAでは、収縮力を抑えることができなかった。
3、そこで、RNA干渉(RNA interference)法を用いて、rhoAをノックダウンした細胞を用いたところ、収縮力を著明に抑制することができた。

報告書

(3件)
  • 2002 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 2001 実績報告書
  • 研究成果

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すべて 文献書誌 (47件)

  • [文献書誌] Ihara E, Hirano K, Hirano M, Nishimura J, Nawata H, Kanaide H: "Mechanism of down-regulation of L-type Ca^<2+> channel in the proliferating smooth muscle cells of rat aorta"J Cell Biochem. 87. 242-251 (2002)

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  • [文献書誌] Nakayama T, Hirano K, Shintani Y, Nishimura J, Nakatsuka A, Kuga H, Takahashi S, Kanaide H: "Unproductive cleavage and inactivation of protease-activated receptor-1 by trypsin in vascular endotheial cells"Br J Pharmacol. 138. 121-130 (2003)

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  • [文献書誌] Takahashi R, Nishimura J, Hirano K, Naito S, Kanaide H: "The mechanisms for tachykinin-induced contractions of the rabbit corpus cavernosum"Br J Pharmacol. (in press).

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  • [文献書誌] Takahashi R, Nishimura J, Hirano K, Naito S, Kanaide H: "The modulation of Ca^<2+> sensitivity regulates contractility of rabbit corpus cavernosum smooth muscle"J Urology. (in press).

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  • [文献書誌] Hirano K, Zeng Y, Hirano M, Nishismura J, Kanaide H: "Sequence requirement for nuclear localization and growth inhibition of p27^<Kip1R>, a degradation-resistant isoform of p27^<Kip1>"J Cell Biochem. (in press).

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  • [文献書誌] Nakayama J, Nishimura J, Hirano K, Kanaide H: "An important role for the Na^+/Ca^<2+> exchanger in decreasing cytosolic Ca^<2+> concentration by isoprenaline in the porcine coronary artery"J Physiol. (in press).

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  • [文献書誌] Ieiri S, Nishimura J, Hirano K et al.: "The mechanism for the contraction induced by leukotrien C4 in guinea-pig coli"Br J Pharmacol. 133. 529-538 (2001)

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  • [文献書誌] Ohnishi Y, Hirano K, et al.: "Inhibitory effect of brefeldin A on the bradykinin-induced relaxation mediated by endothelium-dependent hyperpolarization in the porcine coronary artery"Br J Pharifiacol. 134. 168-178 (2001)

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  • [文献書誌] Nakayama T, Hirano K et al.: "Mechanism of trypsin-induced endothelium-dependent vasorelaxation in the porcine coronary artery"Br J Pharmacol. 134. 815-826 (2001)

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  • [文献書誌] Hirano M, Hirano K, et al.: "Transcriptional up-regulation of p27^<Kip1> during the contact-induced growth arrest in the vascular endothelial cells"Exp Cell Res. 271. 356-367 (2001)

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  • [文献書誌] Hirano K, Hirano M, Zeng Ying et al.: "Cloning and functional expression of a degradation-resistant noel isoform of p27^<Kip1>"Biochem J. 353. 51-57 (2001)

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  • [文献書誌] Setoguchi H, Nishimura J, Hirano K et al.: "Leukotriene C enhances the contraction of porcine tracheal smooth muscle through the activation of Y-27632, a rho kinase inhibitor, sensitive pathway"Br J Pharmacol. 132. 111-118 (2001)

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  • [文献書誌] Arimura T, Suematsu N, Zhou Y, Satoh S et al.: "Identification, characterization and functional analysis of heart-specific myosin light chain phosphatase small subumit"J Biol Chem. 276. 6073-6082 (2001)

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  • [文献書誌] Ihara E, Derkach DN, Hirano K.et al.: "Ca^<2+> influx in the endothelial cells is required for the bradykinin-induced endothelium-dependent contraction in the porcine interlobarrenal artery"J physil. 534. 701-711 (2001)

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  • [文献書誌] Nakamura K, Nishimura J, Hirano K et al.: "Hydroxyfasudil, an active metabolite of fasudil hydrochloride, relaxes the rabbit basilar artery by disinhibition of myosin light chain phosphatase"J Cereb Blood Flow Metab. 21. 876-885 (2001)

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  • [文献書誌] Shintani Y, Hirano K et al.: "Mechanism of trypsin-induced contraction in the rat myometrium : The possible involvement of a nobel member of protease-activated receptor"Br J Pharmacol. 133. 1276-1285 (2001)

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  • [文献書誌] Hirano K., Hirano M., Zeng Ying., Nishimura J., Kanaide H.: "Cloning and functional expression of a degradation-resistant novel isoform of p27^<K1p1>"Biochem J. 353. 51-57 (2001)

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  • [文献書誌] Setoguchi H., Nishimura J., Hirano K., Takahashi S., Kanaide H.: "Leukotriene C_4 enhances the contraction of porcine tracheal smooth muscle through the activation of Y-27632, a rho kinase inhibitor, sensitive pathway"Br J Pharmacol. 132. 111-118 (2001)

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  • [文献書誌] Arimura T., Suematsu N., Zhou Y., Nishimura J., Satoh S., Takashita A., Kanaide H., Kimura A.: "Identification, characterization and functional analysis of heart-specific myosin light chain phosphatase small subunit"J Biol Chem. 276. 6073-6082 (2001)

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  • [文献書誌] Ihara E., Derkach DN., Hirano K., Nishimura J., Nawata H., Kanaide H.: "Ca^<2+> influx in the endothelial cells is required for the bradykinin-induced endothelium-dependent contraction in the porcine interlobar renal artery"J Physiol. 534. 701-711 (2001)

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  • [文献書誌] Nakamura K., Nishimura J., Hirano K., Ibayashi S., Fujishima M., Kanaide H.: "Hydroxyfasudil, an active metabolite of fasudil hydrochloride, relaxes the rabbit basilar artery by disinhibition of myosin light chain phosphatase"J Cereb Blood Flow Metab. 21. 876-885 (2001)

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  • [文献書誌] Shintani Y., Hirano K., Nakayama T., Nishimura J., Nakano H., Kanaide H.: "Mechanism of trypsin-induced contraction in the rat myometrium: The possible involvement of a novel member of protease-activated receptor"Br J Pharmacol. 133. 1276-1285 (2001)

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  • [文献書誌] Ieiri S., Nishimura J., Hirano K., Suita S., Kanaide H.: "The mechanism for the contraction induced by Leukotrien C4 in guinea-pig taenea coli"Br j Pharmacol. 133. 529-538 (2001)

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  • [文献書誌] Ohnishi Y., Hirano K., Nishimura J., Furue M., Kanaide H.: "Inhibitory effect of brefeldin A on the bradykinin-induced relaxation mediated by endothelium-dependent hyperpolarization in the porcine coronary artery"Br J Pharmacol. 134. 134-168 (2001)

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  • [文献書誌] Nakayana T., Hirano K., Nishimura J., Tkahashi S., Kanaide H.: "Mechanism of trypsin-induced endothelium-dependent vasorelaxation in the porcine coronary artery"Br J Pharmacol. 134. 815-826 (2001)

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  • [文献書誌] Ihara E., Hirano K., Hirano M., Nishimura J., Nawata H., Kanaide H.: "Mechanism of down-regulation of L-type Ca^<2+> channel in the proliferating smooth muscle cells of rat aorta"J Cell Biochem. 87. 242-251 (2002)

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  • [文献書誌] Takahashi R., Nishimura J., Hirano K., Naito S., Kanaide H.: "The mechanism for tachykinin-induced contractions of the rabbit corpus cavernosum"Br J Pharmacol. (in press).

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  • [文献書誌] Hirano K., Zeng Y., Hirano M., Nishimura J., Kanaide H.: "Sequence requirement for nuclear localization and growth inhibition of p27^<K1p1R>, a degradation-resistant isoform of p27^<K1p1>"J Cell Biochem. (in press).

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  • [文献書誌] Arimura T, Suematsu N, Zhou Y, Nishimura J, Satoh S, Takeshita A, Kanaide H, Kimura A: "Identification, characterization and functional analysis of heart-specific myosin light chain phosphatase small subunit"J Biol Chem.. 276. 6073-6082 (2001)

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公開日: 2001-04-01   更新日: 2016-04-21  

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