慢性関節リウマチの細胞周期制御療法の開発と実用化の検討

• 研究課題/領域番号: 13854014
• 研究種目: 基盤研究(S)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 内科学一般
• 研究機関: 東京医科歯科大学
• 研究代表者: 宮坂 信之 東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (30157622)
• 研究分担者: 上阪 等 東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助教授 (00251554)
• 研究期間 (年度): 2001 – 2005
• 研究課題ステータス: 完了 (2005年度)
• 配分額: 122,850千円 (直接経費: 94,500千円、間接経費: 28,350千円); 2005年度: 21,060千円 (直接経費: 16,200千円、間接経費: 4,860千円); 2004年度: 20,800千円 (直接経費: 16,000千円、間接経費: 4,800千円); 2003年度: 20,280千円 (直接経費: 15,600千円、間接経費: 4,680千円); 2002年度: 19,890千円 (直接経費: 15,300千円、間接経費: 4,590千円); 2001年度: 40,820千円 (直接経費: 31,400千円、間接経費: 9,420千円)
• キーワード: 関節リウマチ(RA) / サイクリン依存性キナーゼ阻害因子 / アデノウイルスベクター / 動物モデル / 関節リウマチ / 膠原病 / 内科 / 治療 / 細胞周期 / 増殖抑制 / 低分子化合物 / サイクリン依存性キナーゼ / サイクリン依存性キナーゼインヒビター / 遺伝子治療 / 慢性関節リウマチ

研究概要

関節リウマチ(RA)モデルに細胞増殖を抑制するサイクリン依存性キナーゼ阻害因子(CDKI)p16^<INK4a>とp21^<Cip1>関節内遺伝子治療を行い著効した。そこで、細胞周期制御療法の実用化にむけて研究を行った。1)CDKI療法の効果発現機序の詳細な解析:CDKIがCDK抑制依存的および非依存的に炎症や組織破壊にかかわる分子の発現を抑制することも見出し、その分子機構を明らかにした。2)関節炎治療用ウイルスベクターの開発:アデノウイルスベクターによる遺伝子治療における死亡事故をうけ、投与量や免疫原性を軽減するため、5型ウイルスのファイバー部分をDNA組換えにより35型ファイバーやRGD配列を含むものに改変することで、滑膜細胞への遺伝子導入効率を上昇させ、より少量のウイルス量で同等の治療効果を得られることができた。3)生物学的製剤によるCDKI療法の開発:ウイルスベクターによらずに細胞内にCDKI分子を直接導入するため、CDKI分子にHIV transmembrane domain(TAT)配列を加えた組替え蛋白を滑膜細胞内に導入する方法を開発し、発現、細胞増殖抑制機能を確認した。4)CDK阻害性低分子化合物の探索:低分子CDK4阻害剤のうち、免疫系を抑制することなくRA動物モデルの増殖性滑膜炎に治療効果を示す薬剤を探索し、その結果、2つの化合物について用法特許を申請した。5)滑膜細胞での選択的p16^<INK4a>誘導機序の解析:滑膜細胞においてp21を強制発現させるとp16が発現誘導され、その分子経路を検討した。蛍光ディファレンシャル・ディスプレー法やGeneChip法により得た候補遺伝子群から、p16^<INK4a>プロモーター活性を亢進させるものを絞り込むことにより、妊婦血清中に多く存在する蛋白一つが最終候補となった。

研究成果

• [雑誌論文] Pathogenic role of the CXCL16-CXCR6 pathway in rheumatoid arthritis (2005)
  • 著者名/発表者名: Nanki T., Shimaoka T., Hayashida K., Taniguchi K., Yonehara S., Miyasaka N.
  • 雑誌名: Arthritis Rheum. 52(10) ページ: 3004-3014
• [雑誌論文] Inhibition of CX3CL1(Fractalkine) improves experimental autoimmune myositis in SJL/J mice. (2005)
  • 著者名/発表者名: Suzuki F., Nanki T., Imai T., Kikuchi H., Hirohata S., Kohsaka H., Miyasaka N.
  • 雑誌名: J.Immunol 175(10) ページ: 6987-6996
• [雑誌論文] Effect of a small molecule inhibitor of nuclear factor-κB nuclear translocation in a murine model of arthritis and cultured human synovia cells. (2005)
  • 著者名/発表者名: Wakamatsu K., Nanki T., Miyasaka N., Umezawa K., Kubota T.
  • 雑誌名: Arthritis Res.Ther. 7(6)
• [雑誌論文] Development of TCRB CDR3 length repertoire of human lymphocytes (2004)
  • 著者名/発表者名: Nishio J, Suzuki M, Nanki T, Miyasaka N, Kohsaka H.
  • 雑誌名: Int Immunol 16(3) ページ: 423-431
• [雑誌論文] Gene transfer of a cell cycle modulator exerts anti-inflammatory effects in the treatment of arthritis. (2003)
  • 著者名/発表者名: Nonomura Y, Kohsaka H, Nagasaka K, Miyasaka N
  • 雑誌名: J Immunol 171(9) ページ: 4913-4919
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Gene transfer of a cell cycle modulator exerts anti-inflammatory effects in the treatment of arthritis. (2003)
  • 著者名/発表者名: Nonomura Y, Kohsaka H, Nagasaka K, Miyasaka N.
  • 雑誌名: J.Immunol 171(9) ページ: 4913-4919
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Suppression of arthritis by forced expression of cyclin-dependent kinase Inhibitor p21^<Cipl> gene into the joints. (2001)
  • 著者名/発表者名: Nonomura Y, Kohsaka H, Nasu K, Terada Y, Ikeda M, Miyasaka N
  • 雑誌名: Int Immunol 13(6) ページ: 723-731
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Suppression of arthritis by forced expression of cyclin-dependent kinase Inhibitor p21^<Cip1> gene into the joints. (2001)
  • 著者名/発表者名: Nonomura Y, Kohsaka H, Nasu K, Terada Y, Ikeda M, Miyasaka N.
  • 雑誌名: Int Immunol 13(6) ページ: 723-731
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Cyclin-dependent kinase 4/6 directly modulates expression of rheumatoid inflammatory mediators in retinoblastoma protein-dependent and independent pathways
  • 著者名/発表者名: Nonomura Y, Nagasaka K, Hagiyama H, Sekine C, Nanki T, Tamamori-Adachi M, Miyasaka N, Kohsaka H
  • 雑誌名: Arthritis Rheum (in press)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Cyclin-dependent kinase 4/6 directly modulates expression of rheumatoid inflammatory mediators in retinoblastoma protein-dependent and independent pathways
  • 著者名/発表者名: Nonomura Y, Nagasaka K, Hagiyama H, Sekine C, Nanki T, Tamamori-Adachi M, Miyasaka N, Kohsaka H.
  • 雑誌名: Arthritis Rheum. (in press)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Cyclin-dependent kinase 4/6 directly modulates expression of rheumatoi inflammatory mediators in retinoblastoma protein-dependent and independent pathways
  • 著者名/発表者名: Nonomura Y, Nagasaka K, Hagiyama H, Sekine C, Nanki T, Tamamori-Adachi M, Miyasaka N, Kohsaka N.
  • 雑誌名: Arthritis Rheum. in press
• [産業財産権] 抗関節リウマチ活性を有する物質のスクリーニング方法及び評価方法。 (2006)
  • 発明者名: 宮坂信之, 上阪 等
  • 権利者名: 東京医科歯科大学 理化学研究所
  • 出願年月日: 2006-02-20
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [産業財産権] 滑膜細胞増殖抑制剤 (2005)
  • 発明者名: 宮坂信之, 上阪 等
  • 権利者名: 東京医科歯科大学 理化学研究所
  • 出願年月日: 2005-07-18
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Yoshinori Nonomura, Hitoshi Kohsaka, Nobuyuki Miyasaka, et al.: "Gene transfer of a cell cycle modulator exerts anti-inflammatory effects in the treatment of arthritis."J.Immunol.. 171(9). 4913-4919 (2003)
• [文献書誌] Nonomura Y, Kohsaka H, Nasu K, Miyasaka N, et al.: "Suppression of arthritis by forced expression of cyclin-dependent kinase Inhibitor p21cip1 gene into the joints"Int Immunol. 13(6). 723-731 (2001)
• [文献書誌] Kohsaka H, Nasu K, Nonomura Y, Miyasaka N.: "Treatment of Arthritis with Cyclin-dependent Kinase Inhibitor Gene"Jpn.J. Clin Immunol. 23(6). 550-552 (2001)