| 研究課題/領域番号 |
13877037
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| 研究種目 |
萌芽研究
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
実験病理学
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| 研究機関 | 慶應義塾大学 |
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研究代表者 |
岡田 保典 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (00115221)
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| 研究期間 (年度) |
2001 – 2002
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| 研究課題ステータス |
完了 (2002年度)
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| 配分額 *注記 |
2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
2002年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
2001年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
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| キーワード | ADAM / MMP / 基質 / タンパク結合 / 細胞外マトリックス / 酵素 / ADAM MMP基質 |
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| 研究概要 |
ADAM(A Disintegrin And Metalloproteinase)分子は、マトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)のメタロプロテアーゼドメインを共有するMMP近縁遺伝子ファミリーである。ADAMは細胞膜貫通ドメインをもつ膜型ADAMとスロンボスポンジン(TS)ドメインをもつ分泌型ADAMTSに大別されている。本研究では、膜型ADAMと相互作用する分子群を酵母two-hybrid systemでスクリーニングすることにより、酵素の基質やインヒビター、細胞機能制御因子を同定し、膜型ADAMの性質を解明することを目的としている。膜型ADAMの代表としてADAM28を標的とし、本分子のディスインテグリンドメインからcysteine-richドメインまでをコーディングするcDNAをbaitとしてDNA-binding vectorを作成した。次いで、市販のヒト肺組織cDNAライブラリーを組み込んだDNA-activation domain vectorを上記のbaitと共に酵母Y190株に発現し、ヒスチジン要求性とβ-ガラクトシダーゼアッセイにてスクリーニングした。その結果、215個の陽性クローンを得、ダイレクトシークエンスした。得られたクローンのうち、connective tissue growth factor、pulmonary-associated protein A2、P-selectin ligandなどに的を絞って結合能や結合ドメインを検討している。また、ADAM28の全長とメタロプロテアーゼドメインをコーディングするcDNAをクローニングし、FLAG-tagを付けたリコンビナントADAM28を精製し、上記で得られた基質候補分子の分解作用を検討中である。
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