膵癌に対するハンマーヘッド型リボザイムを用いたテロメラーゼ活性抑制療法の試み

• 研究課題/領域番号: 13877207
• 研究種目: 萌芽的研究
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 消化器外科学
• 研究機関: 広島大学
• 研究代表者: 横山 隆 広島大学, 医学部・附属病院, 教授 (60034104)
• 研究分担者: 村上 義昭 広島大学, 医学部・附属病院, 講師 (10263683) ; 桧山 英三 広島大学, 医学部・附属病院, 助教授 (00218744)
• 研究期間 (年度): 2001
• 研究課題ステータス: 完了 (2001年度)
• 配分額: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円); 2001年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
• キーワード: テロメラーゼ / リボザイム / hTR / アポトーシス / テロメア / 膵癌 / 遺伝子導入 / 遺伝子治療

研究概要

現有するヒト膵癌培養細胞8株を用いて、ハンマーヘッド型リボザイムのテロメラーゼ活性の抑制効果を検討した。リボザイム構造を有するRNAの鋳型であるDNAから、試験管内でRNAに転写してハンマーヘッド型リボザイムを作製し、DOTAPを用い膵癌培養細胞に導入した.その後、48時間後にそれらの細胞のテロメラーゼ活性をTRAP assayにより測定したところ、8株中2株で明らかなテロメラーゼ活性の低下を認めた。これらの2株はその後1週間以内に細胞のほとんどが死滅した。他の6株では、テロメラーゼ活性に変化はなかったが、3株で増殖能の低下を認めた。
これらの細胞株をハンマーヘッド型リボザイム処理後、TUNEL法によってアポトーシスの誘導について検討したところ、テロメラーゼ活性が低下した2株では、TUNEL陽性細胞30%以上を占め、明らかにアポトーシスが誘導されていた。他の増殖能が低下した3株では、やはりアポトーシスが誘導されていた。これらの細胞でテロメア検討するとテロメア長の明らかな短縮は認められなかった。
さらに、遺伝子導入により、この配列をベクター(pH β APr-1-neo)に導入し、膵癌培養細胞でハンマーヘッド型リボザイムを恒久的に発現させる系を樹立し、これらの細胞のテロメラーゼ活性を測定した結果その低下を認め、さらにその後6-7日でほとんどの細胞は死滅した。ベクターのみを導入した細胞株が軽度の増殖能低下であったことから、リボザイムによるhTR抑制が細胞死を来したと考えられ、そのメカニズムについて解明する目的で、これらの細胞でのテロメア長、hTR・hTERT発現について詳細に検討中である。

研究成果

• [文献書誌] Hiyama E., et al.: "Clinical utility of telomerase in cancer"Oncogene. 21・1. 643-640 (2002)
• [文献書誌] 檜山英三, 他: "マイクロアレイ法によるサイトカインプロフィール解析"侵襲と免疫. (in press). (2002)
• [文献書誌] Murakami Y., et al.: "Successful diagnosis and resection of icteric type hepatocellular carcinoma"Hepatogastroenterology. (in press). (2002)
• [文献書誌] 村上義昭, 他: "膵胃吻合再建を伴う膵横断切除術"手術. (in press). (2002)
• [文献書誌] 檜山英三, 他: "ショック時におけるサイトカインプロフィール解析のためのマイクロアレイ法の導入とその意義"ショック. 10・8. 677-685 (2002)
• [文献書誌] 横山 隆, 他: "重症急性膵炎に対するSDDの実際と問題点"救急・集中治療. 13・1. 63-71 (2001)
• [文献書誌] 山岡裕明, 他: "肺転移を有する肝芽腫に対する治療戦略"日本外科系連合学会誌. 26・5. 1317-1323 (2001)
• [文献書誌] Hiyama E., et al.: "Immunohistocheical detection of telornerase (hTERT) in human cancer tissues and a subset of cells in normal tissues"Neoplasia. 3・1. 17-26 (2001)
• [文献書誌] Shay, J.W.et al.: "Telomerase and cancer"Human Molecular Genetics. 10・8. 677-685 (2001)
• [文献書誌] Hiyama E., et al.: "Biological characteristics of neuroblastoma with partial deletion in the short arm of chromosome 1"Medical and Pediastric Oncology. 36・1. 67-71 (2001)
• [文献書誌] 檜山英三, 他: "小児固形悪性腫瘍のテロメラーゼ活性とその意義"広島医学. 54・8. 692-697 (2001)
• [文献書誌] Hiyama K. et al.: "Lung Cancer (Methods in Molecular Medicine series)"Detection of telomerase activity in lung cancer tissues (in press). (2002)
• [文献書誌] Hiyama K. et al.: "Non-RI Protocols for L-myc allelotyping and deletion mapping of chromosome 1p in primary lung cancers"Humana Press (in press). (2002)