| 研究課題/領域番号 |
13J00452
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| 研究種目 |
特別研究員奨励費
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 国内 |
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| 研究分野 |
応用生物化学
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| 研究機関 | 筑波大学 |
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研究代表者 |
金子 悠太 筑波大学, 生命環境科学研究科, 特別研究員(DC1)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2015年度)
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| 配分額 *注記 |
3,000千円 (直接経費: 3,000千円)
2015年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
2014年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
2013年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
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| キーワード | CTF18 / 線虫 C. elegans / RPA1 / Proximity ligation assay / タンパク質間相互作用 / タンパク質DNA間相互作用 / 遺伝学的解析 / 紫外線DNA損傷 / １本鎖DNA / インスリンシグナル伝達経路 / DNA損傷 / フォークヘッド型転写因子 / FOXO1 / DNA合成期 / 線虫 / 寿命 |
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| 研究実績の概要 |
本研究では、Ｓ期の紫外線DNA損傷応答機構である損傷乗り越えDNA複製（TLS）における転写因子FOXO1の新規機能の解明、及び生体レベルでの機能解析を目指している。これまでに、FOXO1がS期の紫外線DNA損傷に対して保護的に働くことや、FOXO1がTLSにおける足場タンパク質RPA1と相互作用することなどを見出しており、FOXO1が転写を介さずにTLSに寄与する可能性が示唆されている。
昨年度は、細胞レベルでの複製ストレス依存的な相互作用の検出と線虫におけるFOXO1とRPA1の相同遺伝子であるDAF-16とRPA-1の遺伝学的な相互作用の解析を目指し、それらの実験系の確立及び検討を行った。
複製ストレス応答の評価系の確立を目指し、細胞レベルで二分子間の相互作用を検出するProximity ligation assay: PLAを用いたRPAとの相互作用解析系を確立した。実際に、複製期のDNA損傷応答因子CTF18とRPAの関連をPLAにより確認し、CTF18の複製期DNA損傷応答時特異的なRPAとの相互作用を確認した。本結果は、Molecular medicine reports 誌に受理されており、複製ストレス応答におけるCTF18の新規制御機構解明の糸口として有用な研究成果を残すことが出来た。現在は、この解析法を用い、複製期の紫外線照射後のFOXO1-RPAの相互作用解析やそれに付随する因子の同定を行っている。
線虫での解析においては、RPA-1とDAF-16の遺伝学的解析を目的に、ノックダウン法によるRPA-1発現低下を誘導し、そのノックダウン効率の検証を行った。今後は、DAF-16欠損線虫における紫外線抵抗性を、rpa-1とコントロールノックダウンで比較し、遺伝学的相互作用を検証する予定である。
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| 現在までの達成度 (段落) |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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| 今後の研究の推進方策 |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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