| 研究課題/領域番号 |
13J01969
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| 研究種目 |
特別研究員奨励費
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 国内 |
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| 研究分野 |
神経化学・神経薬理学
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| 研究機関 | 広島大学 |
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研究代表者 |
濱本 明恵 広島大学, 総合科学研究科, 特別研究員(DC2)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2014年度)
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| 配分額 *注記 |
2,400千円 (直接経費: 2,400千円)
2014年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
2013年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
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| キーワード | Gタンパク質共役型受容体 / メラニン凝集ホルモン / 構造活性相関 / Gタンパク質 / 細胞内シグナル / Gタンパク質調節（RGS）タンパク質 / 摂食 / 情動 |
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| 研究実績の概要 |
（Ⅰ）哺乳類MCHR1におけるGタンパク質選択機構の解明
哺乳類メラニン凝集ホルモン受容体MCHR1において、細胞内第2、第3ループ領域に存在するアミノ酸6残基を置換したi2_6sub及びi3_6subはGi/o選択的に活性低下を示す。本年度は、免疫沈降法によりi2_6sub及びi3_6subがGi/oに対する親和性を低下しているかどうかを生化学的に解析した。そして、MCHR1-Gi/o間の安定的な免疫沈降条件を確立したが、再現性を得るのは困難であった。そこで、パーキンエルマー社のEnspire Label-freeを用いて、受容体発現細胞にMCHを添加した際のインピーダンスの変動を測定することで、各置換体のGタンパク質選択性を評価した。その結果、野生型MCHR1はGi/oに由来する初期の急速な上昇応答と、Gqに由来する遅延性の応答が認められた。一方、i2_6subとi3_6subは初期の上昇応答の低下を示し、Gi/o活性低下が認められた。また、論文投稿用に、これまでの実験データの再現性の確認や統計解析を行った。以上の結果をまとめた原著論文を自身で執筆し、Cellular Signaling誌（査読有り）に投稿・掲載された（Hamamoto et al., 2015）。
（Ⅱ）MCHR1-RGS8のin vivo相互作用解析
Gタンパク質調節（RGS8）タンパク質過剰発現マウスを作製し、現時点において、RGS8過剰発現マウスを2ライン確立した[他研究室との共同研究]。そして体重・摂食量測定及び種々の行動実験を実施した。野生型マウスと比較して、RGS8過剰発現マウスにおいて特徴的な行動が認められたため、現在再現性を確認中である。また、口腔への薬物投与実験から、RGS8過剰発現による特徴的な行動はMCHR1を介することが見出された。
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| 現在までの達成度 (段落) |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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| 今後の研究の推進方策 |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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