レトロウイルスにおける受容体非依存性感染と病原性発現機構の解明

• 研究課題/領域番号: 13J04708
• 研究種目: 特別研究員奨励費
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 国内
• 研究分野: 応用獣医学
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 坂口 翔一 京都大学, 医学研究科, 特別研究員(DC1)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2016-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2015年度)
• 配分額: 3,600千円 (直接経費: 3,600千円); 2015年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円); 2014年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円); 2013年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
• キーワード: ネコ白血病ウイルス / 内在性レトロウイルス / 受容体 / ネコモルビリウイルス / FeLIX / 受容体非依存性感染 / エンベロープ / ウイルス分離 / in silico / ネコ / FeLV

研究実績の概要

本研究では、感染補助因子による受容体非依存性感染に着目し、その機構の解析を試みた。
本年度は、ネコ科動物におけるFeLIXの検出と解析を行い、イエネコをはじめ、ライオンなどの大型ネコ科動物、さらに大変貴重なヤマネコの血液を得ることができた。今後、野外におけるFeLV-Tの検出やFeLIX遺伝子の検出および機能解析の成果に期待される。
また、本研究で分離されたネコモルビリウイルス（FmoPV）の受容体は明らかになっておらず、その宿主域も不明である。そこで、様々な動物種・組織に由来する培養細胞を用い、宿主域の解析を行った。その結果、FmoPVはネコとアフリカミドリザル由来の培養細胞のみで増殖した。ネコ由来の培養細胞では、様々な組織由来の細胞で増殖し、他のモルビリウイルスで既知の受容体とは異なる分子を用いて感染することが示唆された。さらに、FmoPVの受容体解析を行うため、ミニゲノム系の作出を行った。その結果、作出したミニゲノム系において、リーダーとトレーラー領域および転写開始と終結シグナルが動作することや、N、P、L蛋白質の供給が必要なことがわかった。さらに、C蛋白質がミニゲノム系を抑制制御している可能性が示唆された。また、この受容体の体内分布を調べるため、ネコを用いたFmoPV感染実験系の作出を行った。加えて、不活化ワクチンの有効性試験も行った。その結果、FmoPVの接種により中和抗体が誘導された。これより、感染は成立し、正常な免疫応答が起こっていると考えられた。経鼻・経口接種での感染が成立したことより、ネコ同士の接触や汚染された環境を介してFmoPVの伝播が起こることが裏付けられた。
本年度の成果により、受容体非依存性感染機構について新たな知見が得られた。今後、これらの結果より、受容体非依存性感染機構を用いたウイルスに対する感染防御に役立つことが期待される。

現在までの達成度 (段落)

27年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

27年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] In vitro host range of feline morbillivirus. (2015)
  • 著者名/発表者名: Sakaguchi, S., Koide, R. and Miyazawa, T.
  • 雑誌名: J. Vet. Med. Sci. 巻: 77 ページ: 1485-1487
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Rapid detection of feline morbillivirus by a reverse transcription loop-mediated isothermal amplification. (2015)
  • 著者名/発表者名: Koide, R., Sakaguchi, S., Ogawa, M. and Miyazawa, T.
  • 雑誌名: J. Vet. Med. Sci. 巻: 78 ページ: 105-108
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Susceptibility of domestic animals to a pseudotype virus bearing RD-114 virus envelope protein. (2015)
  • 著者名/発表者名: Miyaho, R. N., Nakagawa, S., Hashimoto-Gotoh, A., Nakaya, Y., Shimode, S., Sakaguchi, S., Yoshikawa, R., Takahashi, M. U. and Miyazawa, T.
  • 雑誌名: Gene 巻: 567 ページ: 189-195
  • 査読あり
• [雑誌論文] A soluble envelope protein of endogenous retrovirus (FeLIX) present in serum of domestic cats mediates infection of a pathogenic variant of feline leukemia virus. (2015)
  • 著者名/発表者名: Sakaguchi, S., Shojima, T., Fukui, D. and Miyazawa, T.
  • 雑誌名: Journal of General Virology 巻: 96 号: 3 ページ: 681-687
  • DOI: 10.1099/vir.0.071688-0
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Basic biological characterization of feline morbillivirus. (2015)
  • 著者名/発表者名: Koide, R., Sakaguchi, S. and Miyazawa, T.
  • 雑誌名: Journal of Veterinary Medical Science 巻: 印刷中
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Genetic diversity of feline morbilliviruses isolated in Japan. (2014)
  • 著者名/発表者名: Sakaguchi, S., Nakagawa, S., Yoshikawa, R., Kuwahara, C., Hagiwara, H., Asai, K.-I., Kawakami, K., Yamamoto, Y., Ogawa, M. and Miyazawa, T.
  • 雑誌名: Journal of General Virology 巻: 95 号: 7 ページ: 1464-1468
  • DOI: 10.1099/vir.0.065029-0
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] 尿細管間質性腎炎と関連するネコモルビリウイルス (2014)
  • 著者名/発表者名: 坂口翔一、中川草、小川誠、宮沢孝幸
  • 雑誌名: J-Vet 巻: 27 ページ: 74-79
• [雑誌論文] ネコモルビリウイルスの発見～ウイルス性腎不全の可能性～ (2014)
  • 著者名/発表者名: 宮沢孝幸、坂口翔一
  • 雑誌名: NJK 巻: 156 ページ: 31-35
• [雑誌論文] ネコモルビリウイルスに関するQ&A (2014)
  • 著者名/発表者名: 宮沢孝幸、坂口翔一
  • 雑誌名: SAC 巻: 177 ページ: 28-32
• [雑誌論文] Genetic diversity of feline morbilliviruses isolated in Japan. (2014)
  • 著者名/発表者名: Sakaguchi S, 他9名
  • 雑誌名: Journal of General Virology 巻: (印刷中)
  • 査読あり
• [学会発表] in vitro におけるネコモルビリウイルスの宿主域 (2015)
  • 著者名/発表者名: 坂口翔一、小出りえ、小川誠、宮沢孝幸
  • 学会等名: 第63回日本ウイルス学会
  • 発表場所: 福岡県福岡市
  • 年月日: 2015-11-22
  • 国際学会
• [学会発表] One-step nucleic acid detection of feline morbillivirus from clinical specimens (2015)
  • 著者名/発表者名: 小出りえ、坂口翔一，宮沢孝幸
  • 学会等名: 第63回日本ウイルス学会
  • 発表場所: 福岡県福岡市
  • 年月日: 2015-11-22
  • 国際学会
• [学会発表] ネコモルビリウイルスのミニゲノム系の作出 (2015)
  • 著者名/発表者名: 坂口翔一、川端涼子、小出りえ、入江崇、宮沢孝幸
  • 学会等名: 第158回日本獣医学会学術集会
  • 発表場所: 青森県十和田市
  • 年月日: 2015-09-07
• [学会発表] ネコモルビリウイルス感染実験系の作出と不活化ワクチンの有効性試験 (2015)
  • 著者名/発表者名: 坂口翔一、小出りえ、桑原千恵子、酒井沙知、浅井健一、川上和夫、宮沢孝幸
  • 学会等名: 第158回日本獣医学会学術集会
  • 発表場所: 青森県十和田市
  • 年月日: 2015-09-07
• [学会発表] RT-LAMP法によるネコモルビリウイルス検出法の開発 (2015)
  • 著者名/発表者名: 小出りえ、坂口翔一、小川誠、宮沢孝幸
  • 学会等名: 第158回日本獣医学会学術集会
  • 発表場所: 青森県十和田市
  • 年月日: 2015-09-07
• [学会発表] Truncated envelope protein of endogenous retrovirus in blood facilitates infection of a pathogenic exogenous retrovirus (2015)
  • 著者名/発表者名: Sakaguchi, S. and Miyazawa, T.
  • 学会等名: The 13th International Student Seminar
  • 発表場所: 京都大学（京都府京都市）
  • 年月日: 2015-03-03 – 2015-03-07
• [学会発表] 日本でのネコモルビリウイルスの分離 (2015)
  • 著者名/発表者名: 坂口翔一
  • 学会等名: 第4回 Negative Strand Virus-Japan Symposium
  • 発表場所: 沖縄ラグナガーデンホテル（沖縄県宜野湾市）
  • 年月日: 2015-01-19 – 2015-01-21
• [学会発表] ネコに持続感染するネコモルビリウイルスは腎不全を起こすのか？ (2014)
  • 著者名/発表者名: 宮沢孝幸、坂口翔一、小川誠
  • 学会等名: 第35回 動物臨床医学会
  • 発表場所: 大阪国際会議場（大阪府大阪市）
  • 年月日: 2014-11-14 – 2014-11-16
• [学会発表] Serological survey and characterization of feline morbillivirus in Japan (2014)
  • 著者名/発表者名: Sakaguchi S., Nakagawa S. and Miyazawa, T.
  • 学会等名: International Feline Retrovirus Research Symposium & International Society for Companion Animal Infectious Disease (IFRRS & ISCAID) 2014
  • 発表場所: Niagara-on-the-Lake（カナダ）
  • 年月日: 2014-10-19 – 2014-10-22
• [学会発表] 日本国内におけるネコモルビリウイルスの分離と抗体調査 (2014)
  • 著者名/発表者名: 坂口翔一、中川草、吉川禄助、山本祐、小川誠、宮沢孝幸
  • 学会等名: 第157回 獣医学会
  • 発表場所: 北海道大学（北海道札幌市）
  • 年月日: 2014-09-09 – 2014-09-12
• [学会発表] 感染性分子クローン由来サルレトロウイルス4型実験感染ニホンザルにおけるウイルスの体内動態 (2013)
  • 著者名/発表者名: 坂口翔一, 他8名
  • 学会等名: 日本獣医学会学術集会
  • 発表場所: 岐阜大学(岐阜)
  • 年月日: 2013-09-20
• [学会発表] 感染性分子クローン由来ウイルスを用いたニホンザル血小板減少症の病態解析 (2013)
  • 著者名/発表者名: 坂口翔一, 他8名
  • 学会等名: 日本野生動物医学会
  • 発表場所: 京都大学(京都)
  • 年月日: 2013-08-31
• [備考] 進化ウイルス研究領域（宮沢孝幸研究室）のホームページ
  • URL: http://paleovirology.jimdo.com/%E6%9C%80%E8%BF%91%E3%81%AE%E7%99%BA%E8%A1%A8%E8%AB%96%E6%96%87/
• [備考] 京都大学ウイルス研究所 進化ウイルス研究領域 宮沢孝幸研究室
  • URL: http://paleovirology.jimdo.com
• [産業財産権] 新規ネコモルビリウイルス株、不活化ワクチン製剤、感染症予防法 (2014)
  • 発明者名: 坂口翔一、宮沢孝幸、川上和夫、浅井健一
  • 権利者名: 共立製薬株式会社
  • 産業財産権種類: 特許
  • 出願年月日: 2014-04-01