犬の肥満細胞腫におけるイマチニブ耐性化の分子病態の解明と耐性克服戦略の構築

• 研究課題/領域番号: 13J10765
• 研究種目: 特別研究員奨励費
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 国内
• 研究分野: 臨床獣医学
• 研究機関: 日本獣医生命科学大学
• 研究代表者: 小林 正人 日本獣医生命科学大学, 獣医学研究科, 特別研究員(DC1)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2016-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2015年度)
• 配分額: 3,300千円 (直接経費: 3,300千円); 2015年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円); 2014年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円); 2013年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
• キーワード: 犬 / 肥満細胞腫 / イマチニブ / 耐性 / ユビキチン / KIT / 二次変異 / ERK

研究実績の概要

本年度は、犬の肥満細胞腫株化細胞CoMSから作製したイマチニブ耐性株rCoMS1で認められたKITの過剰発現が、イマチニブ耐性に及ぼす影響を明らかにすることを目的とした。
KIT分解能の解析により、rCoMS1で見られたKITの過剰発現はKITの分解遅延よってKITが蓄積した結果であることが明らかとなった。さらに、この反応はイマチニブの有無に伴って可逆性に起こることから、rCoMS1におけるKITの過剰発現は、イマチニブに対する反応性の変化であり、KITの細胞内動態の変化により生じると考えられた。
rCoMS1におけるKITのユビキチン化の解析において、KITの発現が少ない細胞ではKITがユビキチン化しているのに対して、KITが過剰に発現している細胞ではKITのユビキチン化が明らかに減少していた。さらに、KITの過剰発現は細胞表面で認められたことから、rCoMS1で認められたKITの可逆性の過剰発現はイマチニブによりKITユビキチン化を可逆的に抑制し、その結果、細胞膜上でKITが増加したと考えられた。
rCoMS1におけるKITリン酸化の解析とイマチニブの細胞増殖抑制試験により、KIT発現がわずかである細胞ではイマチニブによる明らかなKITリン酸化の抑制と細胞増殖の抑制が見られたが、KIT発現が過剰に増加した細胞ではいずれの抑制も見られなかった。このことから、KITの過剰発現は、CoMSのイマチニブ耐性化において中心的な役割を果たすことが明らかとなった。

現在までの達成度 (段落)

27年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

27年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] Molecular changes associated with the development of resistance to imatinib in an imatinib-sensitive canine neoplastic mast cell line carrying a KIT c.1523A>T mutation (2015)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi M, Kuroki S, Tanaka Y, Moriya Y, Kozutumi Y, Uehara Y, Ono K, Tamura K, Washizu T, Bonkobara M.
  • 雑誌名: Eur J Haematol. 巻: In press 号: 6 ページ: 524-31
  • DOI: 10.1111/ejh.12526
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Molecular cloning of canine co-chaperone small glutamine-rich tetratricopeptide repeat-containing protein α (SGTA) and investigation of its ability to suppress androgen receptor signalling in androgen-independent prostate cancer. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kato, Y., Ochiai, K., Michishita, M., Azakami, D., Nakahira, R., Morimatsu, M., Ishiguro-Oonuma, T., Yoshikawa, Y., Kobayashi, M., Bonkobara, M., Kobayashi, M., Takahashi, K., Watanabe, M., and Omi, T.
  • 雑誌名: The Vwterinary Journal 巻: 206 号: 2 ページ: 145-148
  • DOI: 10.1016/j.tvjl.2015.08.002
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Molecular Cloning and Gene Expression of Canine Apoptosis Inhibitor of Macrophage (2014)
  • 著者名/発表者名: Tomura S, Uchida M, Yonezawa T, Kobayashi M, Bonkobara M, Arai S, Miyazaki T, Tamahara S, Matsuki N.
  • 雑誌名: Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ 巻: 76 号: 12 ページ: 1641-1645
  • DOI: 10.1292/jvms.14-0166
  • NAID: 130004684872
  • ISSN: 0916-7250, 1347-7439
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Imatinib-associated tumour response in a dog with a non-resectable gastrointestinal stromal tumour harbouring a c-kit exon 11 deletion mutation. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi M, Kuroki S, Ito K, Yasuda A, Sawada H, Ono K, Washizu T, Bonkobara M.
  • 雑誌名: Vet J. 巻: 198 号: 1 ページ: 271-274
  • DOI: 10.1016/j.tvjl.2013.05.035
  • 査読あり
• [学会発表] Molecular Changes Associated with the Development of Resistance to Imatinib in an Imatinib-Sensitive Canine Mast Cell Tumor Cell line (2014)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi M, Kuroki S, Ito K, Uehara Y, Kozutumi Y, Tanaka Y, Moriya Y, Tamura K, Bonkobara M, Washizu T
  • 学会等名: The 16th Biennial Congress of the 
International Society for Animal Clinical Pathology
  • 発表場所: Copenhagen
  • 年月日: 2014-06-25 – 2014-06-29
• [学会発表] Molecular Changes Associated with the Development of Resistance to Imatinib in an Imatinib-Sensitive Canine Neoplastic Mast Cell Line Carrying a KIT c.1523A>T Mutation (2014)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi M, Kuroki S, Ito K, Uehara Y, Kozutumi Y, Tanaka Y, Moriya Y, Tamura K, Bonkobara M, Washizu T
  • 学会等名: The 2015 ACVIM Forum
  • 発表場所: Indianapolis
  • 年月日: 2014-06-04 – 2014-06-06
• [学会発表] イマチニブが奏効した犬の消化管間質腫瘍の1症例 (2013)
  • 著者名/発表者名: 小林正人、黒木詩織、伊藤慶太、安田暁子、澤田治美、小野憲一郎、鴛巣月美、盆子原誠
  • 学会等名: 日本獣医臨床病理学会 2013年大会
  • 発表場所: 日本獣医生命科学大学(東京都武蔵野市)
  • 年月日: 2013-06-02