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NMRを用いた紫外線損傷DNA修復機構の構造生物学的解析

研究課題

研究課題/領域番号 14026013
研究種目

特定領域研究

配分区分補助金
審査区分 生物系
研究機関東京大学

研究代表者

嶋田 一夫  東京大学, 大学院・薬学系研究科, 教授 (70196476)

研究分担者 寺沢 宏明  東京大学, 大学院・薬学系研究科, 助手 (10300956)
研究期間 (年度) 2002
研究課題ステータス 完了 (2002年度)
配分額 *注記
3,800千円 (直接経費: 3,800千円)
2002年度: 3,800千円 (直接経費: 3,800千円)
キーワード安定同位体標識 / 多次元NMR法 / CPD photolyase / 光回復酵素 / NMR
研究概要

安定同位体標識DNA光産物の調製に成功し、多次元NMR法によるNMRシグナル帰属が完了した。高度好熱菌由来のCPD photolyase(阪大・院理・倉光博士より大腸菌発現系が供与された)を題材として、紫外線損傷DNA (CPD)と修復酵素の相互作用を原子レベルで明らかにしている。CPD photolyaseの精製法については、従来法に改善を加え、活性体の効率的精製に成功した。光回復酵素との複合体におけるCPDのNMRシグナル帰属を進めるとともに、安定同位体標識法の確立を行った。DNA-酵素複合体のような高分子量複合体では、上記の解析で用いた^<13>C、^<15>N標識試料以外に、さらに^2H標識を施したCPDを調製する必要がある.この三重標識CPDと光回復酵素との複合体の多次元多核種NMR解析を行うことで、標識CPDのNMRシグナルの帰属を行い、NOEやスピン結合などのNMR構造情報をもとに複合体形成時におけるCPDのコンホメーションの決定を行った。さらに、変異体による解析や蛍光標識DNAなどを用いて構造情報を確認し、修復酵素による損傷部位の特異的認識メカニズムおよび反応機構を明らかにした。

報告書

(1件)
  • 2002 実績報告書
  • 研究成果

    (6件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (6件)

  • [文献書誌] Tamiji Nakanishi: "Determination of the Interface of a Large Protein Complex by Transferred"J. Mol. Biol. 318. 245-249 (2002)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書
  • [文献書誌] Koh Takeuchi: "Solution Structure of ω-Grammotoxin SIA, a gating modifier of P/Q and N"J. Mol. Biol.. 321. 517-526 (2002)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書
  • [文献書誌] Yoshimasa Kyogoku: "Structural Genomics of Membrane Proteins"Accounts. Chem. Res.. (in press).

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書
  • [文献書誌] Yoshitomo Suhara: "Oligomers of Glycamino Acid"Bioorgan. Med. Chem.. 10. 1999-2013 (2002)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書
  • [文献書誌] Noritaka Nishida: "Backbone ^1H,^<13>C,^<15>N resonance assignments of the vo Willebrand"J. Biomol. NMR. (in press).

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書
  • [文献書誌] Noritaka Nishida: "Novel Collagen-Binding Mode of the VWA Domain Determined"Nature Struct. Biol.. (in press).

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書

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公開日: 2002-04-01   更新日: 2018-03-28  

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