| 研究課題/領域番号 |
14028039
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| 研究種目 |
特定領域研究
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 審査区分 |
生物系
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| 研究機関 | 奈良先端科学技術大学院大学 |
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研究代表者 |
山中 伸弥 奈良先端科学技術大学院大学, 遺伝子教育研究センター, 助教授 (10295694)
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| 研究分担者 |
三井 薫 奈良先端科学技術大学院大学, 遺伝子教育研究センター, 助手 (40324975)
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| 研究期間 (年度) |
2002
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| 研究課題ステータス |
完了 (2002年度)
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| 配分額 *注記 |
7,100千円 (直接経費: 7,100千円)
2002年度: 7,100千円 (直接経費: 7,100千円)
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| キーワード | 翻訳調節 / ES細胞 / プロテオミックス / 質量分析 / 発癌 / 癌抑制遺伝子 |
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| 研究概要 |
NAT1はRNAエディティングAPOBEC1の過剰発現により誘導された肝細胞癌において、原因遺伝子の候補として同定された。ノックアウトマウスの解析の結果、NAT1はES細胞の分化とマウス初期発生に必須であることがわかった。NAT1は翻訳開始因子eIF4Gと類似しており、eIF4Gと同様に複数の蛋白質結合ドメインを有していることから、アダプター蛋白質として機能している可能性が高い。そこで本研究ではNAT1と結合する蛋白質の同定を目標とした。NAT1のC末端にカルモジュリン結合蛋白質とプロテインAの2つのタッグを融合させた蛋白質を発現するベクターをES細胞に導入した。この細胞を大量培養し、蛋白質を抽出した。ついでIgGビーズとカルモジュリンビーズによる2段階のアフィニティー精製を行った結果、NAT1を高純度に精製することに精製した。精製産物をSDS-PAGEにて分離し、銀染色による可視化を行った結果、複数の蛋白質が特異的に共精製されていることがわかった。これらのバンドを切り出し、LC/MS/MS質量分析により同定を試みた。一つは以前からNAT1と結合することが知られているeIF4Aであった。他のバンドに関してはサンプル量が少なく、同定には至らなかった。
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