| 研究課題/領域番号 |
14030097
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| 研究種目 |
特定領域研究
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 審査区分 |
生物系
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| 研究機関 | 大阪府立成人病センター研究所 |
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研究代表者 |
高橋 克仁 大阪府立成人病センター, 研究所・病態生理学部門, 部門長 (40211338)
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| 研究分担者 |
山村 倫子 大阪府立成人病センター, 研究所・病態生理学部門, 主任研究員 (50342994)
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| 研究期間 (年度) |
2002
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| 研究課題ステータス |
完了 (2002年度)
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| 配分額 *注記 |
6,000千円 (直接経費: 6,000千円)
2002年度: 6,000千円 (直接経費: 6,000千円)
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| キーワード | がん遺伝子治療 / ヘルペスウイルス / 血管平滑筋 / カルポニン / 制限増殖型ウイルス |
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| 研究概要 |
ヒトカルポニン遺伝子の平滑筋特異的なプロモーター領域を、HSV-1ウイルスの複製開始に必須な転写因子をコードするICP4遺伝子の上流に挿入し、さらにその上流に標識遺伝子lacZを、ICP4の下流にInternal Ribosomal Entry Site (IRES)-EGFPを連結した相同組換えベクターpKX2betaG3を構築した。このDNA断片をICP4欠失HSV変異体d120のリボヌクレオチド還元酵素(RR, ICP6)の遺伝子座に相同組換え法を用いて挿入し、ICP4とRRの二重欠失変異体を作製した。さらに、VEGFシグナルを抑制する可溶性VEGF受容体sFlt-1 cDNA(東京大学医科学研究所、渋谷氏より供与)をEGFPの代りにICP4の下流に挿入し、IRESを用いて発現させるための相同組換えベクターを作成し、ICP4欠失HSV変異体d120のリボヌクレオチド還元酵素(RR, ICP6)の遺伝子座への最初の相同組換え実験を行った。
一方、d12.CALPΔRRベクターをヌードマウス(♀)眼窩下静脈より2×10^7p.f.u./マウスで投与し、経時的に血液、脳、心臓、大動脈、肺、肝臓、腎臓、脾臓、卵巣、膀胱を採取した。マウス血清中の複製可能なd12.CALPΔRRベクターは24時間でほぼ消失した。また、肝、脾、肺組織から複製活性のあるd12.CALPΔRRベクターは検出されなかった。投与後4日目およびそれ以降では、これらの組織でLacZ、ICP4ともに発現は認められず、病理学的にも明らかな組織障害は認められなかった。また投与後の血液生化学検査(肝・腎機能、糖・脂質代謝機能)では、d12.CALPΔRRベクターによる異常は認められなかった。
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