| 研究課題/領域番号 |
14042269
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| 研究種目 |
特定領域研究
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 審査区分 |
理工系
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| 研究機関 | (財)冲中記念成人病研究所 |
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研究代表者 |
小澤 安則 財団法人冲中記念成人病研究所, 研究員 (10124306)
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| 研究分担者 |
田口 学 財団法人冲中記念成人病研究所, 研究員 (00265141)
竹下 章 財団法人冲中記念成人病研究所, 研究員 (20322646)
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| 研究期間 (年度) |
2002 – 2003
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| 研究課題ステータス |
完了 (2003年度)
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| 配分額 *注記 |
3,600千円 (直接経費: 3,600千円)
2003年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
2002年度: 2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
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| キーワード | 内分泌撹乱物質 / SXR / MDR1 / DEHP / SRC-1 / ドミンナントネガティブ / ビスフェノールA / 多剤耐性 / フタル酸化合物 / ポリ塩化ビニル |
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| 研究概要 |
はじめに)癌細胞が多剤耐性を獲得する機序のひとつにMDR1遺伝子の高発現があげられる。MDR1は核内ホルモン受容体SXRにより発現調節されるが、内分泌撹乱物質であるビスフェノールAやDEHPはSXRにリガンドとして結合しMPR1発現を増加させる。一般に変異受容体には正常受容体の機能を阻害するドミナントネガティブ作用がある。本研究は1)変異SXRの作成と機能解析、2)癌細胞に変異SXRを過剰発現させ内因性SXRの機能を阻害してMDR1発現が抑制されるかを検討し多剤耐性に対する遺伝子治療の可能性を探る。
方法)434アミノ酸SXRのC端13個を欠失した変異SXR(MUT-SXR)、野生型SXR(WT-SXR)、そしてMDR1プロモーター領域を組み込んだMDR1-TK-LUCレポーターをCV1細胞にトランスフェクトしレポーターアッセイをおこなった。さらにMDR1 mRNA測定のためリアルタイムPCRを大腸癌細胞株LS174T細胞を用いておこなった。
結果)レポーターアッセイでリファンピシン刺激によるWTの転写活性化はMUTにより抑制された。このドミナントネガティブ効果の機序を知るため2-ハイブリッド法によりcoactivator(SRC-1)やcorepressor(NCoR, SMRT)とSXRの結合を検討した。SRC-1はWTとRFP依存性に結合したが、MUTとは結合しなかった。一方NCoRやSMRTはWTに比してMUTとより強く結合した。リアルタイムPCRによるMDR1 mRNA定量法を確立しLS174T細胞でMDR1 mRNAはリファンピシン依存性に約5倍増加した(10μM)。
考察)MUT-SXRはドミナントネガティブ効果によりMDR1発現を抑える可能性が示唆された。現在LS174T細胞にMUT-SXRを過剰発現させた株を作成しリアルタイムPCRにてMDR1発現を評価中である。
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