| 研究課題/領域番号 |
14045230
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| 研究種目 |
特定領域研究
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 審査区分 |
理工系
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| 研究機関 | 独立行政法人産業技術総合研究所 |
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研究代表者 |
横山 憲二 独立行政法人産業技術総合研究所, バイオニクス研究センター, 副研究センター長 (80242121)
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| 研究期間 (年度) |
2002 – 2003
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| 研究課題ステータス |
完了 (2003年度)
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| 配分額 *注記 |
3,700千円 (直接経費: 3,700千円)
2003年度: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
2002年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
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| キーワード | ペプチドチップ / キナーゼ / 蛍光共鳴エネルギー転移 / MAPキナーゼ / cAMP依存性キナーゼ / ペプチドコンジュゲートポリマー / グリコースオキシダーゼ / 蛍光検出 / 固相合成 / ラジカル共重合 |
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| 研究概要 |
リサイクル利用でき、さらに多種類の標的タンパク質を検出できるキナーゼ測定用ペプチドチップに関する研究を行った。すなわち、蛍光エネルギー転移によるクエンチングを利用し、分裂促進物質活性化タンパク質キナーゼ(MAPKキナーゼ)およびcAMP依存性プロテインキナーゼ(PKA)の活性をイメージングするためのペプチドの設計を行った。本センサーペプチドは、リン酸化されることにより負電荷が生じて親水性が高くなり、立体構造変化を起こして、蛍光強度が変化すると考えられる。具体的には、MAPKの配列(HTGFLTEYVAT,下線のチロシンとトレオニンがリン酸化される)またはKemptide配列(LRRASLG,下線のセリンがリン酸化される)を含む種々のペプチドを用いて、このペプチドのC末端に蛍光ドナーとしてEDANSを、N末端にクエンチャーとしてdabcylを修飾したペプチドを合成した。
合成によって得られた非リン酸化及びリン酸化センサーペプチドの蛍光スペクトルを測定した結果、リン酸化センサーペプチドの蛍光強度は、非リン酸化ペプチドより大きく、顕著な差が見られた。これは、センサーペプチドがリン酸化されることによって、親水性が高くなり、ペプチドが伸びたような構造をとるために、蛍光色素間の距離が離れ、エネルギー転移が起こりにくくなったためであると考えられる。これにより、複数のキナーゼ活性をモニタリングできるチップの作製の可能性が示された。
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