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In vivo模倣系でのタンパク質高次構造転移スイッチング機構解明

研究課題

研究課題/領域番号 14350433
研究種目

基盤研究(B)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 生物・生体工学
研究機関北陸先端科学技術大学院大学

研究代表者

高木 昌宏  北陸先端科学技術大学院大学, 材料科学研究科, 教授 (00183434)

研究分担者 白木 賢太郎  筑波大学, 物理工学系, 助教授 (90334797)
研究期間 (年度) 2002 – 2004
研究課題ステータス 完了 (2004年度)
配分額 *注記
14,600千円 (直接経費: 14,600千円)
2004年度: 3,100千円 (直接経費: 3,100千円)
2003年度: 2,700千円 (直接経費: 2,700千円)
2002年度: 8,800千円 (直接経費: 8,800千円)
キーワード凝集 / リフォールディング / 添加剤 / タンパク質 / ミスフォールディング / アルギニン / ポリアミン / 熱成熟 / 構造転移 / 超好熱菌
研究概要

タンパク質は一般に、高次構造を形成して機能を発現する。しかし、タンパク質はしばしば不安定であり、内部疎水性領域が露出して凝集し、活性を失う。タンパク質の凝集を防ぎ、活性を持った構造に巻き戻すための様々な研究がなされている。
これまでにアルギニンを添加する方法は、変性構造から天然構造への回収率が高く、適用できるタンパク質も多いため、有効な方法として利用されている。
我々は、近年、ポリアミンがニワトリ卵白リゾチームの熱による不可逆な凝集に対して、アルギニンよりも高い抑制効果を示すことを報告した。さらに、シクロヘキサンやp-フェニレンジアミンなど、加熱凝集を抑制する化合物が線維化の抑制効果を示すこと、また、、β2ミクログロブリン変異体の線維化の実験では、スペルミンおよびm-キシリレンジアミン、p-ジアミノシクロヘキサン、カフェインが高い効果を示した。これらの分子構造を図2に示す。スペルミンは加熱凝集抑制に効果を示すと同時に、α-シヌクレインの線維伸長を促進することが報告されている。アミノ基の配位による非共有電子の偏りと、疎水性の強さによって抑制効果が決まるのではないかと考えた。
また、一時的に高温環境下に変性蛋白質をさらすことで、リフォールディングを促進させることに成功し、特許を取得した。
主な成果を列挙すると、平成14年、アミノ酸エステル類の凝集抑制効果、平成15年、多くの蛋白質を同一条件でアミロイド化、平成16年、アミロイド形成抑制に必要な化学構造の抽出と、高温リフォールディング法の開発が挙げられる。原著論文16報、学会発表70件以上。

報告書

(4件)
  • 2004 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 2003 実績報告書
  • 2002 実績報告書
  • 研究成果

    (34件)

すべて 2005 2004 2003 2002 その他

すべて 雑誌論文 (25件) 産業財産権 (2件) 文献書誌 (7件)

  • [雑誌論文] Amino acid esters prevent thermal in activation and aggregation of lysozyme.2005

    • 著者名/発表者名
      Kentaro Shiraki, Motonori Kudou, Ryusuke Sakamoto, Itaru Yanagihara, Masahiro Takagi.
    • 雑誌名

      Biotechnology Progress. (in press)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Unfolding mechanism of a hyperthermophilic protein O6-methylguanine-DNA methyltransferase.2005

    • 著者名/発表者名
      Shingo Nishikori, Kentaro Shiraki, Shinsuke Fujiwara, Tadayuki Imanaka, Masahiro Takagi.
    • 雑誌名

      Biophysical Chemistry (in press)

    • NAID

      120007139217

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Stretched-exponential analysis of heat-induced aggregation of apo-concanavalin A.2005

    • 著者名/発表者名
      Motonori Kudo, Kentaro Shiraki, Masahiro Takagi.
    • 雑誌名

      Protein J. (in press)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Contribution of protein-surface ion pairs of a hyperthermophilic protein on thermal stability in high ionic strength condition.2004

    • 著者名/発表者名
      K.shiraki et al.
    • 雑誌名

      J.Biosci.Bioeng. 97

      ページ: 95-95

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Characterization of heat-induced aggregates of concanavalin a using fluorescent probes.2004

    • 著者名/発表者名
      M.Kudou et al.
    • 雑誌名

      Science and Technology of Advanced Materials (STAM) 5

      ページ: 339-339

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Mutational effects on O6-methylguanine-DNA methyltransferase from hyperthermophile contribution of ion-pair network to protein thermostability.2004

    • 著者名/発表者名
      S.Nishikori et al.
    • 雑誌名

      J.Biochemistry (Tokyo) 135

      ページ: 525-525

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Arginine ethylester prevents thermal inactivation and aggregation of lysozyme.2004

    • 著者名/発表者名
      K.Shiraki et al.
    • 雑誌名

      Eur.J.Biochem. 271

      ページ: 3242-3242

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 実績報告書 2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Equilibrium and kinetic stability of a hyperthermophilic protein, O6-methylguanine-DNA methyltransferase under various extreme conditions.2004

    • 著者名/発表者名
      S.Nishikori et al.
    • 雑誌名

      J.Biochemistry (Tokyo) 136

      ページ: 503-503

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Contribution of protein-surface ion pairs of a hyperthermophilic protein on thermal stability in high tonic strength condition.2004

    • 著者名/発表者名
      Kentaro Shiraki, Shingo Nishikori, Shinsuke Fujiwara, Tadayuki Imanaka, Masahiro Takagi.
    • 雑誌名

      J.Biosci.Bioeng. 97

      ページ: 75-77

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Characterization of heat-induced aggregates of concanavalin a using fluorescent probes.2004

    • 著者名/発表者名
      Motonori Kudou, Kentaro Shiraki, Masahiro Takagi.
    • 雑誌名

      Science and Technology of Advanced Materials (STAM) 5

      ページ: 339-341

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Mutational effects On O6-methylguanine-DNA methyltransferase from hyperthermophile : contribution of ion-pair network to protein thermostability.2004

    • 著者名/発表者名
      Shingo Nishikori, Kentaro Shiraki, Kiyonobu Yokota, Naoshikge Izumikawa, Shinsuke Fujiwara, Hiroshi Hashimto, Tadayuki Imanaka, Masahiro Takagi.
    • 雑誌名

      J.Biochem.(Tokyo) 135

      ページ: 525-532

    • NAID

      10016199524

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Biophysical analysis of heat-induced structural maturation of glutamate dehydrogenase from a hyperthermophilic archaeon.2004

    • 著者名/発表者名
      Naoshige Izumikawa, Kentaro Shiraki, Shinsuke Fujiwara, Tadayuki Imanaka, Masahiro Takagi.
    • 雑誌名

      J.Biosci.Bioeng. 97

      ページ: 305-309

    • NAID

      110002665303

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Arginine ethylester prevents thermal inactivation and aggregation of lysozyme.2004

    • 著者名/発表者名
      Kentaro Shiraki, Motonori Kudou, Shingo Nishikori, Harue Kitagawa, Tadayuki Imanaka, Masahiro Takagi.
    • 雑誌名

      Eur.J.Biochem. 271

      ページ: 3242-3247

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Equilibrium and kinetic stability of a hyperthermophilic protein, O6-methylguanine-DNA methyltransferase in various extreme conditions.2004

    • 著者名/発表者名
      Shingo Nishikori, Kentaro Shiraki, Shinsuke Fujiwara, Tadayuki Imanaka, Masahiro Takagi
    • 雑誌名

      J.Biochem.(Tokyo) 136

      ページ: 503-508

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Contribution of protein-surface ion pairs of a hyperthermophilic protein on thermal stability in high ionic strength condition.2004

    • 著者名/発表者名
      K.Shiraki et al.
    • 雑誌名

      J.Biosci.Bioeng. 97

      ページ: 95-95

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [雑誌論文] Characterization of heat-induced aggregates of concanavalin a using fluorescent probes.2004

    • 著者名/発表者名
      M.Kudou et al.
    • 雑誌名

      Science and Technology of Advanced Materials(STAM) 5

      ページ: 339-339

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [雑誌論文] Mutational effects on 06-methylguanine-DNA methyltransferase from hyperthermophile contribution of ion-pair network to protein thermostability.2004

    • 著者名/発表者名
      S.Nishikori et al.
    • 雑誌名

      J.Biochemistry(Tokyo) 135

      ページ: 525-525

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [雑誌論文] Equilibrium and kinetic stability of a hyperthermophilic protein, 06-methylguanine-DNA methyltransferase in various extreme conditions.2004

    • 著者名/発表者名
      S.Nishikori et al.
    • 雑誌名

      J.Biochemistry(Tokyo) 136

      ページ: 503-503

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [雑誌論文] Dissolution of protein aggregation by small amine compounds2003

    • 著者名/発表者名
      Kentaro Shiraki, Motonori Kudou, Yoshinobu Aso, Masahiro Takagi.
    • 雑誌名

      Science and Technology of Advanced Materials (STAM) 4

      ページ: 55-59

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Surface histidine residue of archaeal hi stone affects DNA compaction and thermostability.2003

    • 著者名/発表者名
      Hiroki Higashibata, Masood Siddiqui, Masahiro Takagi, Tadayuki Imanaka, Shinsuke Fujiwara
    • 雑誌名

      FEMS Microbiology Letters 224

      ページ: 17-22

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Genetic, enzymatic, and structural analyses of phenylalanyl-tRNA synthetase from Thermococcus kodakaraensis KOD1.2003

    • 著者名/発表者名
      Kentaro Shiraki, Masao Tsuji, Yoshiteru Hashimoto, Kenzo Fujimoto, Shinsuke Fujiwara, Masahiro Takai, Tadayuki Imanaka.
    • 雑誌名

      J.Biochemistry (Tokyo) 134

      ページ: 567-574

    • NAID

      10012058479

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Prevention of thermal in activation and aggregation of lysozyme by polyamines.2003

    • 著者名/発表者名
      Motonori Kudou, Kentaro Shiraki, Shinsuke Fujiwara, Tadayuki Imanaka, Masahiro Taka i.
    • 雑誌名

      Eur.J.Biochem. 270

      ページ: 4547-4554

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Biophysical effect of amino acids on the prevention of protein aggregation.2002

    • 著者名/発表者名
      Kentaro Shiraki, Motonori Kudou, Shinsuke Fujiwara, Tadayuki Imanaka, Masahiro Takagi.
    • 雑誌名

      J.Biochemistry (Tokyo) 132

      ページ: 591-595

    • NAID

      10010652270

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Construction and high cytoplasmic expression of a Tumoricidal single-chain antibody against hepatocellular carcinoma.2002

    • 著者名/発表者名
      Duanpen Sandee, Sumalee Tungpradabkul, Manae Tsukio, Tadayuki Imanaka, Masahiro Takagi.
    • 雑誌名

      BMC Biotechnol.Sep 12 2(1)

      ページ: 16-16

    • NAID

      120001746772

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Screening for stable mutants with amino-acid pairs substituted for the disulfide bond between residues 14 and 38 of bovine pancreatic trypsin inhibitor (BPTI).2002

    • 著者名/発表者名
      Yoshihisa Hagihara, Kentaro Shiraki, Tsutomu Nakamura, Koichi Uegaki, Masahiro Takagi, Tadayuki Imanaka, Noboru Yumoto
    • 雑誌名

      J.Biol.Chem. 277

      ページ: 51043-51048

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [産業財産権] 変性蛋白質の巻き戻し方法2003

    • 発明者名
      坂本 龍祐, 白木 賢太郎, 高木 昌宏
    • 権利者名
      発明者
    • 産業財産権番号
      2003-370290
    • 出願年月日
      2003-10-30
    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [産業財産権] 変性蛋白質の巻き戻し方法2003

    • 発明者名
      坂本龍祐, 白木賢太郎, 高木昌宏
    • 権利者名
      発明者
    • 産業財産権番号
      2003-370290
    • 出願年月日
      2003-10-30
    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [文献書誌] Kentaro Shiraki, Motonori Kudou, Yaoshinobu Aso Masahiro Takagi.: "Dissolution of protein aggregation by small amine compounds."Science and Technology of Advanced Materials (STAM). (In press). (2003)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Motonori Kudou, Kentaro Shiraki, Shinsuke Fujiwara, Tadayuki Imanaka, Masahiro Takagi: "Prevention of thermal inactivation and aggregation of lysozyme by polyamines."Eur.J.Biochem.. 270. 4547-4554 (2003)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Kentaro Shiraki, Shingo Nishikori, Shinsuke Fujiwara, Tadayuki Imanaka, Masahiro Takagi.: "Contribution of protein-surface ion pairs of a hyperthermophilic protein on thermal stability in high ionic strength condition."J.Biosci.Bioeng.. 97. 75-77 (2004)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Motonori Kudou, Kentaro Shiraki, Masahiro Takagi.: "Characterization of heat-induced aggregates of concanavalin a using fluorescent probes."Science and Technology of Advanced Materials (STAM). 5(In press). (2004)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Kentaro Shiraki, Motonori Kudou, Shinsuke Fujiwara, Tadayuki Imanaka, Masahiro Takagi: "Biophysical effect of amino acids on the prevention of protein aggregation"J. Biochemistry (Tokyo). 132. 591-595 (2002)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書
  • [文献書誌] Kentaro Shiraki, Motonori Kudou, Yaoshinobu Aso, Masahiro Takagi: "Dissolution of protein aggregation by small amine compounds, in press (2003)"Science and Technology of Advanced Materials (STAM). (In press). (2003)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書
  • [文献書誌] 白木賢太郎, 高木昌宏: "遺伝子ドグマからタンパク質ドグマへ(タシパク質フォールディング研究の展開) 巻 (2002)"現代化学. 375. 14-20 (2002)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書

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公開日: 2002-04-01   更新日: 2016-04-21  

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