| 研究課題/領域番号 |
14360105
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
水産学一般
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
山羽 悦郎 北海道大学, 北方生物圏フィールド科学センター, 教授 (60191376)
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| 研究分担者 |
吉崎 悟朗 東京海洋大学, 海洋科学部, 助教授 (70281003)
平井 俊朗 帝京科学大学, 理工学部, 助手 (30238331)
荒井 克俊 北海道大学, 大学院・水産科学研究科, 教授 (00137902)
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| 研究期間 (年度) |
2002 – 2003
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| 研究課題ステータス |
完了 (2003年度)
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| 配分額 *注記 |
15,000千円 (直接経費: 15,000千円)
2003年度: 5,800千円 (直接経費: 5,800千円)
2002年度: 9,200千円 (直接経費: 9,200千円)
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| キーワード | 生殖系列キメラ / 始原生殖細胞 / PGC / 異種間キメラ / GFP / nos1 / 生殖細胞質 / vasa / nos 1 / TGF-β super family / vas |
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| 研究概要 |
1)スズキ目魚類シロウオとウキゴリのPGCsの起源と動態を、vasa mRNAに対するwhole mount in situ hybridizationと組織学的観察により明らかにした。
2)PGCsを含む胞胚期の胚盤断片の移植により生殖系列キメラの誘導を図った。その結果、同種間ではこの移植により生殖系列キメラが誘導されたが、異種間では、供与体胚細胞がホスト内で分散した場合のみ誘導された。
3)生殖系列に特異的な遺伝子vasaあるいはnos1の3'末端非翻訳領域と緑色蛍光蛋白遺伝子を接続したキメラRNAを注入することで、ニシン、サケ科魚種、コイ目魚種、スズキ目魚種のPGCsがGFP蛍光で可視化された。
4)胚盤断片の移植では誘起できなかった生殖系列キメラを誘導するため、可視化したPGCsを異種間での異時的な移植を行なった。その結果、少なくともコイ目の魚種間では、生殖系列キメラが誘導された。
5)ニジマス孵化稚魚から単離したPGC、を異系統のニジマス宿主(孵化稚魚)に移植することで、移植PGC由来の卵・精子を得ることに成功した。なお、これらの配偶子は機能的であり、正常な次世代の作出も可能であった。これと同様の方法で、ニジマスPGCをヤマメに移植することで、ヤマメ精巣内で機能的なニジマス精子を得ることに成功し、次世代の作出にも成功した。
6)Vasa-GFP遺伝子導入ニジマスから単離した生殖隆起を酵素的に分散した後、セルソーターを用いて、高純度かつ高生残率の始原生殖細胞を回収する技術を確立した。
7)分離したPGCの凍結保存技法を開発した。凍結・解凍後のPGCは宿主胚の腹腔内に移植すると、宿主生殖腺に向かって移動し、最終的には生殖腺内に取り込まれ、増殖もすることを確認した。
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