| 研究課題/領域番号 |
14370298
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
血液内科学
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
中島 秀明 東京大学, 医科学研究所, 助手 (30217723)
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| 研究分担者 |
北村 俊雄 東京大学, 医科学研究所, 教授 (20282527)
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| 研究期間 (年度) |
2002 – 2003
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| 研究課題ステータス |
完了 (2003年度)
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| 配分額 *注記 |
13,900千円 (直接経費: 13,900千円)
2003年度: 6,700千円 (直接経費: 6,700千円)
2002年度: 7,200千円 (直接経費: 7,200千円)
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| キーワード | 血球分化 / 転写因子 / C / EBPα / PU.1 / トランスジェニックマウス / 造血 / EBPε |
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| 研究概要 |
転写制御の観点から血液細胞の分化制御およびlineage switchを分子レベルで検討するため、骨髄球系特異的転写因子であるC/EBPα,PU.1をエストロゲンレセプターのリガンド結合領域と融合させ、4-hydroxy tamoxifen(4-HT)に反応する活性誘導型転写因子を作製した。これらをpMX-IRES-GFPレトロウイルスベクターを用いてBaF3細胞に遺伝子導入したところ、樹立したBaF3/CEBPα-ER, BaF3/PU.1-ER細胞は4-HT刺激で細胞増殖が急激に抑制され、一部はアポトーシスをおこして死滅した。これらより、作製したER融合転写因子は期待通りに機能していることが確認された。
続いてこれら分子をH-2Kプロモーターのコントロール下で発現するトランスジェニックマウス(Tg)を作製した。C/EBPα-ER Tgは計8ライン、PU.1-ER Tgは計5ラインにおいてtransgeneの染色体へのインテグレーションをサザンブロット法により認めた。このうちC/EBPα-ER TgではRT-PCR上5ラインにtransgeneの発現を認め、さらにウエスタンブロット法でこのうち1ラインのみがC/EBPα-ER蛋白を発現していた。RT-PCRおよびウエスタンブロットによる各組織の発現解析では、C/EBPα-ERは胸腺・脾臓に高発現しており、骨髄・末梢血でも中等量発現していた。また、発現したC/EBPα-ER蛋白は4-HTに反応してDNA結合能を示すことがゲルシフト法により確認された。PU.1-ERマウスについても同様の解析を現在施工中である。
今後はこれらのTgマウスを用い、4-HTにより転写活性を誘導した場合の血球分化の変化をコロニーアッセイ、FACSなどにより詳細に解析していく予定である。
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