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頭頚部癌細胞由来α-N-アセチルガラクトサミニダーゼのクローニングと機能解析

研究課題

研究課題/領域番号 14370683
研究種目

基盤研究(B)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 外科系歯学
研究機関松本歯科大学

研究代表者

上松 隆司  松本歯科大学, 大学院・歯学独立研究科, 助教授 (40203476)

研究分担者 古澤 清文  松本歯科大学, 大学院・歯学独立研究科, 教授 (90165481)
高橋 昌宏  松本歯科大学, 歯学部, 助手 (90340059)
堂東 亮輔  松本歯科大学, 歯学部, 助手 (40329470)
松浦 隆  松本歯科大学, 歯学部, 助手 (10298408)
田中 仁  松本歯科大学, 歯学部, 講師 (50267788)
倉 雄宏  松本歯科大学, 歯学部, 助手 (00340050)
研究期間 (年度) 2002 – 2004
研究課題ステータス 完了 (2004年度)
配分額 *注記
13,800千円 (直接経費: 13,800千円)
2004年度: 2,500千円 (直接経費: 2,500千円)
2003年度: 4,000千円 (直接経費: 4,000千円)
2002年度: 7,300千円 (直接経費: 7,300千円)
キーワード頭頸部癌 / α-N-アセチルガラクトサミニダーゼ / クローニング / マクロファージ活性化因子 / α-N-acetylgalactosaminidase / 免疫抑制
研究概要

【目的】本年度の研究では、分離された頭頸部癌培養細胞から抽出したα-N-acetyl galactosaminidase活性を示す蛋白に対するポリクローナル抗体を作成し、遺伝子クローニングを行った。
【方法】1.頭頸部癌培養細胞から抽出したα-N-acetylgalactosaminidase活性を示す蛋白を抗原とし、ラビットを宿主としてポリクローナル抗体を作製した。2.頭頸部癌のHela細胞より抽出したmRNAを抽出し、1^<st> strand cDNAを調製後、Hela細胞より抽出したUNIZAP XR VECTORに挿入してcDNAベクターライブラリーを作製した。ファージベクターのホストとしてXL-1 Blueを用いた。3.XL-1 Blueを用いてファージタイターを測定したところ、2.4×10^<12>Pfu/mlであった。4.IPTGを添加したNZY平板培地に、ファージを吸着させたXL-1 Blueをまき、42℃の温度シフト後に形成されたプラークをブロッティング膜に転写させた。作製したポリクローナル抗体を用いてECL法によってクローンを検出した。
【結果】Hela細胞より抽出した、約2500塩基のリーディングフレームを持つ新規mRNAをクローニングした。本蛋白は、DEVD Boxを有し、N末端側に塩基性アミノ酸配列と核移行シグナルが、またC末端側には回文構造がみられた。NCBIのBlastnによる解析では、RNAヘリカーゼ様構造を持つとともに、α-ガラクトシダーゼやグルクロニダーゼとの相同性もみられ、糖鎖構造を脱糖鎖する機能を有すると考えられた。

報告書

(4件)
  • 2004 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 2003 実績報告書
  • 2002 実績報告書
  • 研究成果

    (21件)

すべて 2004 2003 その他

すべて 雑誌論文 (15件) 文献書誌 (6件)

  • [雑誌論文] Effect of salivary gland adenocarcinoma cell-derived alpha-N- acetylgalactosaminidase on the bioactivity of macrophage activating factor.2004

    • 著者名/発表者名
      Matsuura T. et al.
    • 雑誌名

      International Journal of Oncology 24(3)

      ページ: 521-528

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Induction of calcification in MC3T3-E1 cells by inorganic polyphosphate.2004

    • 著者名/発表者名
      Kawazoe Y. et al.
    • 雑誌名

      Journal of Dental Research 83(8)

      ページ: 613-618

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Effects of oral squamous cell carcinoma-derived TGF-beta1 on CD26/DPPIV expression in T cells.2004

    • 著者名/発表者名
      Uematsu T., et al.
    • 雑誌名

      Anticancer Research 24(2B)

      ページ: 619-624

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Orthodontic treatment of an impacted dilacerated maxillary central incisor combined with surgical exposure and apicoectomy.2004

    • 著者名/発表者名
      Uematsu S., et al.
    • 雑誌名

      Angle Orthodontics 74(1)

      ページ: 132-136

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Effect of salivary gland adenocarcinoma cell-derived alpha-N-acetyl galactosaminidase on the bioactivity of macrophage activating factor.2004

    • 著者名/発表者名
      Matsuura T. et al.
    • 雑誌名

      International Journal of Oncology 24(3)

      ページ: 521-528

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Effects of oral squamous cell carcinoma-derived TGF-beta1 on CD26/DPPIV expression in T cells.2004

    • 著者名/発表者名
      Uematsu T. et al.
    • 雑誌名

      Anticancer Research 24(2B)

      ページ: 619-624

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Orthodontic treatment of an impacted dilacerated maxillary central incisor combined with surgical exposure and apicoectomy.2004

    • 著者名/発表者名
      Uematsu S. et al.
    • 雑誌名

      Angle Orthodontics 74(1)

      ページ: 132-136

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Effect of salivary gland adenocarcinoma cell-derived alpha-N-acetyl galactosaminidase on the bioactivity of macrophage activating factor.2004

    • 著者名/発表者名
      Matsuura T, et al.
    • 雑誌名

      International Journal of Oncology 24・3

      ページ: 521-528

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [雑誌論文] Induction of calcification in MC3T3-E1 cells by inorganic polyphosphate.2004

    • 著者名/発表者名
      Kawazoe Y, et al.
    • 雑誌名

      Journal of Dental Research 83・8

      ページ: 613-618

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [雑誌論文] Effects of oral squamous cell carcinoma-derived TGF-beta1 on CD26/DPPIV expression in T cells.2004

    • 著者名/発表者名
      Uematsu T, et al.
    • 雑誌名

      Anticancer Research 24・2B

      ページ: 619-624

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [雑誌論文] Orthodontic treatment of an impacted dilacerated maxillary central in cisor combined with surgical exposure and apicoectomy.2004

    • 著者名/発表者名
      Uematsu S, et al.
    • 雑誌名

      Angle Orthodontics 74・1

      ページ: 132-136

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [雑誌論文] Expression of ATP-binding cassette transporter in human salivary ducts.2003

    • 著者名/発表者名
      Uematsu T., et al.
    • 雑誌名

      Archive of Oral Biology 48(1)

      ページ: 87-90

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] 唾液腺癌細胞における多剤耐性機構獲得2003

    • 著者名/発表者名
      堂東亮輔
    • 雑誌名

      口腔組織培養学会雑誌 12(1)

      ページ: 27-28

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Expression of ATP-binding cassette transporter in human salivary ducts.2003

    • 著者名/発表者名
      Uematsu T. et al.
    • 雑誌名

      Archive of Oral Biology 48(1)

      ページ: 87-90

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Mechanisms of multidrug resistance in salivary gland adenocarcinoma cells.2003

    • 著者名/発表者名
      Doto R.et al.
    • 雑誌名

      Japanese Journal of Oral Tissue Culture Research 12(1)

      ページ: 27-28

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Matsuura T., et al.: "Effect of salivary gland adenocarcinoma cell-derived alpha-N-acetylgalactosaminidase on the bioactivity of macrophage activating factor"International Journal of Oncology. 24・3. 521-528 (2004)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Uematsu T., et al.: "Effects of Oral Squamous Cell Carcinoma-derived TGF-β1 on CD26/DPPIV Expression in T Cells"Anticancer Research. 24・2(印刷中). (2004)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Shiba T., et al.: "Effect of inorganic polyphosphate on periodontal regeneration"Key Engineering Material. 245・256. 1119-1122 (2004)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Uematsu S., et al.: "The orthodontic treatment of an impacted dilacerated maxillary central incisor combined with surgical exposure and apicoectomy"Angle Orthodontist. 74・1. 132-136 (2004)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] 堂東亮輔: "唾液腺癌細胞における抗癌剤耐性獲得機構 -MDR1,MRP1およびGSTの発現について-"日本口腔組織培養学会誌. 12・1. 27-28 (2003)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Uematsu T., et al.: "Expression of ATP-binding cassette transporter in human salivary ducts"Arch.Oral Biol.. 48・1. 87-90 (2003)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書

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公開日: 2002-04-01   更新日: 2016-04-21  

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