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歯周組織再生におけるティシュエンジニアリングに関する基礎的研究-エナメル基質タンパク質と歯根膜細胞産生タンパク質の有効性-

研究課題

研究課題/領域番号 14370714
研究種目

基盤研究(B)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 歯周治療系歯学
研究機関神奈川歯科大学

研究代表者

川瀬 俊夫  神奈川歯科大学, 歯学部, 教授 (30084784)

研究分担者 出口 眞二  神奈川歯科大学, 歯学部, 教授 (60121018)
藤原 努  神奈川歯科大学, 歯学部, 助教授 (50084778)
根岸 秀幸  神奈川歯科大学, 歯学部, 講師 (60121026)
松澤 光洋  神奈川歯科大学, 歯学部, 助手 (60288082)
研究期間 (年度) 2002 – 2004
研究課題ステータス 完了 (2004年度)
配分額 *注記
13,300千円 (直接経費: 13,300千円)
2004年度: 2,500千円 (直接経費: 2,500千円)
2003年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
2002年度: 8,600千円 (直接経費: 8,600千円)
キーワードエナメル基質タンパク質 / 歯周組織再生 / ヒト歯根膜由来線維芽細胞(HPLF) / ラット骨髄由来細胞(RBMC) / 細胞接着因子 / 足場(スキャフォールド) / 細胞外基質タンパク質の発現 / 細胞遊走因子 / 歯根膜由来線維芽細胞 / ラット骨髄由来幹細胞 / ECMの遺伝子発現 / DNAチップ解析 / 細胞遊走活性 / 接着分子の遺伝子発現
研究概要

歯周組織再生におけるエナメル基質タンパク質(EMD)の有効性に注目されているが、詳細な機構については不明である。我々は以前からヒト歯根膜由来細胞(HPLF)が産生するタンパク質(CMP)に細胞接着活性があることを認めていた。EMDとCMPを疎水性のdishにコーティングすると、HPLFが接着し、増殖を示すことから両タンパク質には疎水性のアミノ酸配列が示唆された。歯根膜の再生には歯槽骨から遊走した未分化の幹細胞は必須の因子であることから、本研究においてHPLFに加えてラット骨髄由来細胞(RBMC)を未分化間葉系細胞として用いた。
それぞれ25μg/mlのEMDとCMPを疎水性のdishに24時間、4℃でコーティングし、加熱処理をしたBSAでさらに処理後、HPLFとRBMCを播種し培養を行った。HPLFにおいて細胞接着活性(CASF活性測定)、DNA量の分析およびALPase活性を測定すると、EMDとCMP共に細胞の接着数は同じであるが、CMPによる細胞伸展が促進していた。しかし、インテグリンのβ1のmRNAの発現に変化はみられないが、β3のmRNAの発現が抑制された。また、ALPase活性においてCMPがEMDよりHPLFの分化促進が認められた。一方、EMDにサイトカイ活性があるかどうかは、培地添加してみるとHPLFとRBMCにDNA量とALPase活性に変化は認められなかった。
歯根膜に未分化幹細胞を想定したRBMCがEMDを足場とした状況で、RBMCの増殖、分化促進をALPase活性、さらにRT-PCR法によるALPase, osteopontin(OPN),骨に特異的な基質タンパク質であるbone sialoprotein, osteopontin(OPN)およびosteocalcin(OCN)のmRNAの発現を検討した。RBMCのALPase活性はCMPと比較してEMDによって2倍上昇し、ALPase mRNAのRT-PCRのデータからも、ALPase発現がEMDを足場として促進していた。さらに、BSPおよびOPNの発現はコントロールでも発現しているもののEMDとCMPによりさらに促進された。6日間の培養初期ではコントロールおよびCMPにおいてOCNは発現はほとんど認められないが、EMDで明らかにOCNの発現が認められた。一方、RBMCを遊走させる因子はEMDには全く認められず、CMPとHPLFの培養上清に強い遊走活性が認められた。
以上のことから、1)EMDにHPLFが接着し、HPLFの増殖と分化が促進され、2)分化促進されたHPLFからRBMCを遊走する因子が分泌され、3)遊走したRBMCがEMDに接着し、4)EMDを足場とし、またHPLFと直接接触することにより、5)ALPaseの発現上昇、さらに骨に特異的なBSPおよびOCNの産生を促進しRBMCは骨系細胞へ分化する。従って、EMDは歯周組織の再生ばかりか治癒過程において有効な足場となることが示唆された。

報告書

(4件)
  • 2004 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 2003 実績報告書
  • 2002 実績報告書
  • 研究成果

    (21件)

すべて 2005 2004 2003 2002 その他

すべて 雑誌論文 (16件) 文献書誌 (5件)

  • [雑誌論文] Bone regeneration : Effect of basic fibroblast/estrogen combination on bone formation in rat bone marrow stromal cels.2005

    • 著者名/発表者名
      Ozono S, Kinoshita Y, Negishi H, Kawase T
    • 雑誌名

      Bulletin of Kanagawa Dental College 33

      ページ: 25-30

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Proliferation and differentiation of rat bone marrow stromal cell on PGA/collagen sponge.2005

    • 著者名/発表者名
      Fujita H, Kinoshita Y, Ozono S, Negishi H, Kawase T et al.
    • 雑誌名

      Tissue Engineering 11

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Bone regeneration : Effect of basic fibroblast/estrogen combination on bone formation in rat bone marrow stromal cells.2005

    • 著者名/発表者名
      Ozono S, Kinoshita Y, Negishi H, Kawase T
    • 雑誌名

      Bulletin of Kanagawa Dental College 33

      ページ: 25-30

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Proliferation and differentiation of rat bone marrow stromal Cell on PGA/collegen sponge.2005

    • 著者名/発表者名
      Fujita M, Kinoshita Y, Ozono S, Negishi H, Kawase T et al.
    • 雑誌名

      Tissue Engineering 11(in press)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Durability of FTLA Treatment as a Medicament for Dentin Hypersensitivity -Abrasion Resistance and Profiles of Fluoride Release-2005

    • 著者名/発表者名
      K.Tomiyama, Y.Mukai, H.Negishi, T.Fujiwara, T.Kawase, et al.
    • 雑誌名

      Dental Materials Journal 23(4)

      ページ: 585-592

    • NAID

      110002983810

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [雑誌論文] Proliferation and Differentiation of Rat Bone Marrow Stromal Cells on PGA/Collagen Sponge2005

    • 著者名/発表者名
      M.Fujita, Y.Kinoshita, S.Ozono, H.Negishi, T.Kawase, et al.
    • 雑誌名

      Tissue Engineering 11(9-10)

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [雑誌論文] Bone Regeneration : Effect of basic fibroblast Growth factor/estrogen Combinations on bone formation in rat bone marrow stromal cells.2005

    • 著者名/発表者名
      S.Ozono, Y.Kinoshita, H.Negishi, T.Kawase
    • 雑誌名

      The Bulletin of Kanagawa Dental College 33(1)

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [雑誌論文] エナメル基質タンパク質によるラット骨髄由来細胞の骨系細胞への分化誘導について2004

    • 著者名/発表者名
      大澤 隆, 根岸秀幸, 川瀬俊夫
    • 雑誌名

      神奈川歯学 39

      ページ: 1-12

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Durability of FTLA treatment as a medicament for dentin hypersensitivity -Abrasion resistance and profiles of fluoride release-.2004

    • 著者名/発表者名
      Tomiyama K, Negishi H, Fujihara T, Kawase T, Teranaka T et al.
    • 雑誌名

      Dental Materials Journal 23

      ページ: 585-592

    • NAID

      110002983810

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Enamel matrix proteins Stimulate Osteogenic differentiation of rat bone marrow derived cells2004

    • 著者名/発表者名
      Osawa T, Negishi H, Kawase T
    • 雑誌名

      Kanagawashigaku 39

      ページ: 1-12

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Durability of FTLA treatment as a medicament for dentin Hypersensitivity-Abrasion resistance and profiles of fluoride release-2004

    • 著者名/発表者名
      Tomiyama K, Negishi H, Fujihara T, Kawase T, Teranaka T et al.
    • 雑誌名

      Dental Materials Journal 23

      ページ: 585-592

    • NAID

      110002983810

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] エナメル基質タンパク質によるラット骨髄由来細胞の骨系細胞への分化誘導について2004

    • 著者名/発表者名
      大澤 隆, 根岸秀幸, 川瀬俊夫
    • 雑誌名

      神奈川歯学 39(1)

      ページ: 1-12

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [雑誌論文] Effects of pubertal treatment with bisphenol A and bis-GMA on sex hormone level in male rats.2003

    • 著者名/発表者名
      Saito D, Ozono S, Kawase T, Teranaka T et al.
    • 雑誌名

      Environmental Sciences 20

      ページ: 55-61

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Effect of pubertal treatment with bisphenol A and bis-GMA on sex hormone level in male rats.2003

    • 著者名/発表者名
      Saito D, Ozono S, Kawase T, Teranaka T et al.
    • 雑誌名

      Environmental Sciences 20

      ページ: 55-61

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Effect of enamel matrix derivatives on migration of human periodontal ligament fibroblasts.2002

    • 著者名/発表者名
      Deguchi S, Tago K, Yamashita O, Sato S, Kobe Y, Sugaya A, IIjima Y, Kawase T
    • 雑誌名

      Bulletin of Kanagawa Dental College 30

      ページ: 27-31

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Effect of enamel matrix derivative on migration of human Periodontal ligament fibroblasts2002

    • 著者名/発表者名
      Deguchi S, Tago K, Yamashita O, Sato S, Kobe Y, Sugaya A, Iijima Y, Kawase T
    • 雑誌名

      Bulletin of Kanagawa Dental College 30

      ページ: 27-31

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 大澤 隆, 根岸秀幸, 川瀬俊夫: "エナメル基質タンパク質によるラット骨髄由来細胞の骨系細胞への分化誘導について"神奈川歯学. 39(1). (2004)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Deguchi S, Kawase T et al.: "Effect of enamel matrix protein derivative on migration of human periodontal ligament fibroblasts"Bull. Kanagawa Dent. Col.. 30(1). 27-31 (2002)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書
  • [文献書誌] Saito D, Kawase T, Koshika S et al.: "Effects of pubertal treatment with bisphenol A and Bis-GMA on sex hormone level in male rats"Environmental Sciences. 10(1). 55-61 (2002)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書
  • [文献書誌] 室井剛史, 根岸秀幸, 藤原 努, 川瀬俊夫: "歯科用ポリカーボネート中のビスフェノールAの定量と溶出動態について"神奈川歯学. 37(2/3). 76-82 (2002)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書
  • [文献書誌] 富山 潔, 根岸秀幸, 藤原 努, 川瀬俊夫: "象牙質知覚過敏症に対する細管封鎖法"FTLA法"の耐酸性能-水分透過率の測定-"日本歯科保存学会雑誌. 45(4). 688-695 (2002)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書

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公開日: 2002-04-01   更新日: 2016-04-21  

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