| 研究課題/領域番号 |
14540568
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
遺伝
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| 研究機関 | 東京都立大学 |
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研究代表者 |
駒野 照弥 東京都立大学, 理学研究科, 教授 (00087131)
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| 研究分担者 |
古屋 伸久 東京都立大学, 理学研究科, 助手 (50244413)
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| 研究期間 (年度) |
2002 – 2003
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| 研究課題ステータス |
完了 (2003年度)
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| 配分額 *注記 |
4,000千円 (直接経費: 4,000千円)
2003年度: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
2002年度: 2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
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| キーワード | プラスミドR64 / 接合伝達 / IV型線毛 / シャフロン / oriTオペロン |
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| 研究概要 |
プラスミドR64の接合伝達領域は、54kbのDNA領域に49個の遺伝子を含む。そのうち24遺伝子が表面接合伝達に必須である。液内接合伝達にはさらに12個のpil遺伝子が必要であり、細線毛をコードする。細線毛の先端に局在するPilVアドヘシンのC末部はシャフロンの多重DNA逆位により7種に変換する。1)R64のプレピリンペプチダーゼをコードするpilU遺伝子の43株の突然変異株を分離し、PilUがアスパラギン酸ペプチダーゼであることを証明した。phoA、lacZとの融合遺伝子の活性を測定した結果、PilUは数回のトランスメンブラン領域を含む複雑な膜トポロジーが示された。2)R64シャフロンのsfx組換え配列は非対称であるが、対称組換え配列を作成すると、順向きsfx部位間での組換えが起きた。C末欠失Rciを用いた実験により、対称組換え配列を用いる組換えには、RciのC末部が必要でないことが示された。また各種PilVアドヘシンのC末部が、受容菌表層に存在する受容体であるリポ多糖に特異的に結合することがブロット法・ビアコア法で示された。3)R64によるCloDF13の可動化には、trbACともに必要でないことが示され、R64のtrbAC産物がFのTraDに相当する機能を持つことが示唆された。4)R64のoriTオペロンは、oriT配列とnikAB遺伝子からなる。精製NikABタンパクとoriTDNAとから、ニック導入活性をもつoriT-NikAB複合体が形成された。5)IncI_γプラスミドR621aの接合伝達領域はR64のそれとよく似ているが、R621a, R64では、exc, traY遺伝子は多少異なり、異なる表面排斥グループに属する。traY産物が排斥の特異性を決定するが、その特異性決定領域の特定を目的として多数の変異株を作成した。
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