| 研究課題/領域番号 |
14540633
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
動物生理・代謝
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| 研究機関 | 東京都立大学 |
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研究代表者 |
矢澤 徹 東京都立大学, 大学院・理学研究科, 助手 (30106603)
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| 研究期間 (年度) |
2002 – 2003
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| 研究課題ステータス |
完了 (2003年度)
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| 配分額 *注記 |
3,300千円 (直接経費: 3,300千円)
2003年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
2002年度: 2,800千円 (直接経費: 2,800千円)
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| キーワード | 甲殻類 / 血液 / ストレス / ホルモン / ロブスター / マイクロダイアリシス / 質量分析 / ペプチド / HPLC / イセエビ / 行動 |
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| 研究概要 |
アメリカザリガニProcambarus clarkiiやアメリカンロブスターHamarus amaricanusなどの大きな鋏みを持つ甲殻類が鋏みを振り上げて威嚇行動をする際に、この行動に連関して血液中に未知の物質が放出されていることが突き止められた。この未知の物質を特定することが目的でる。現有設備で分析できる範囲で研究した結果、ペプチドがもっとも有力な候補となっていたので検討した。ペプチドとして有力候補は5アミノ酸から構成される甲殻類の代表的なホルモンであるプロクトリンであるが、まずプロクトリンを検出できる検出機器を確保することからはじめた。飛行時間検出型質量分析器によりプロクトリンが分子量648付近で検出できることが、機器の性能上、確かめられた。これを検出するため先ずマトリクスとして何を用いるか検討した。その結果、最終的に絞り込まれた物質は二つで、αシアノ4ヒドロキシ桂皮酸よりも、3,5ジ・メトキシ4ヒドロキシ桂皮酸が優れていることがわかった。プロクトリンはミリモル濃度程度の高い濃度ならば飛行時間検出型質量分析器で検知できることがわかった。そこで血液サンプルを得、除蛋白処理前、処理後のサンプルを得て実験した結果、除蛋白処理前の濃度の高いと思われる状態のサンプルからもプロクトリンらしいピークは検出できず、血液中の濃度は恐らくこの検出装置で測定できる濃度より低いことが判明した。したがって、ストレスホルモンとして血中に放出されたペプチドの増減を確実に捉えるためには、かなり感度の優れた機器やサンプル処理を工夫することが必要であることが明らかになった。今後の有力な方法としては新たにペプチド分析が可能なHPLCを購入することであるが、血液サンプルの成分の濃縮技術の開拓によっても突破できる問題であるかも知れない。しかしこの点はなお検討を要する。本研究最終年度においてはイセエビPamulirus japanicusでもこのストレス物質があるらしいことを確認した。これはこの物質が甲穀類に一般化できるらしいことを示唆しているので、今後の物質特定は機器の工夫のみならず、サンプルの工夫で新たな展開を見出せるものと期待される。動物一般にストレスホルモンが出でいるといわれるがなお未解明であり、この研究の発展には依然意義がある。
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