| 研究課題/領域番号 |
14560076
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
応用微生物学・応用生物化学
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| 研究機関 | 大阪府立大学 |
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研究代表者 |
荒井 基夫 大阪府立大学, 農学生命科学研究科, 教授 (80081537)
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| 研究分担者 |
川口 剛司 大阪府立大学, 農学生命科学研究科, 助教授 (70195056)
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| 研究期間 (年度) |
2002 – 2003
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| 研究課題ステータス |
完了 (2003年度)
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| 配分額 *注記 |
3,600千円 (直接経費: 3,600千円)
2003年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
2002年度: 2,300千円 (直接経費: 2,300千円)
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| キーワード | セルラーゼ / グルコシダーゼ / 遺伝子 / 酵母 / Aspergillus / セルロース / Aspergillus aculeatus / アルコール |
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| 研究概要 |
セルロースを直接発酵する酵母の育種をめざし、Aspergillus aculeatusからクローニングしたセルラーゼ成分を用いて、セルロースを直接発酵する酵母の育種をめざした。まず、エンド型酵素であるFI-CM-celulase(cmc1)とFII-CM-celulase(cmc2)の発現ベクターを構築し、酵母宿主の染色体の選択マーカーにエレクトロポレーション法で複数の栄養要求性かつ遺伝子表現型の異なる4種類の酵母の染色体に部位特異的に挿入した。導入株では遺伝子が発現していると考えられた。次に、cmc1とcmc2の多重発現を試みた所、両遺伝子の発現が認められた。次に、
エキソ型酵素として、Fi-Avicelase(aviIII)とFIII-Avicelase(cbh1)とβ-グルコシダーゼ1(bgl1)の3種の発現ベクターを構築し、酵母に導入したが、有意な発現を認めることは出来なかった。そこで、bgl1については分泌シグナルを変えたところ、若干の活性上昇が認められた。一方、上で得られた形質転換株の染色体解析を行ったところ、発現ベクターの挿入が確認された。今後さらに多重発現の研究を進める必要がある。
セルラーゼ遺伝子の発現制御をうまくコントロールするために、セルラーゼ遺伝子発現におけるCREAの作用機構について調べた。まず、creA遺伝子のDNA結合部位のみをGST融合タンパク質として発現させ、精製標品を得た。これを用いて解析を行った結果、翻訳開始点より-589,-450,-391の部位にCREAが結合することが示唆された。今後これらの部位がin vivoでCREA結合部位として機能することを解析する必要がある。
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