| 研究課題/領域番号 |
14560169
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
水産化学
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| 研究機関 | 東京海洋大学 (2004-2005)
東京海洋大学(水産) (2002-2003) |
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研究代表者 |
和田 俊 東京海洋大学, 海洋科学部, 教授 (00089830)
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| 研究期間 (年度) |
2002 – 2005
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| 研究課題ステータス |
完了 (2005年度)
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| 配分額 *注記 |
4,200千円 (直接経費: 4,200千円)
2005年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
2004年度: 200千円 (直接経費: 200千円)
2003年度: 200千円 (直接経費: 200千円)
2002年度: 3,300千円 (直接経費: 3,300千円)
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| キーワード | トリグリセリド / 分子種分析 / 高速液体クロマトグラフィ / トリアコンチルカラム / グラディエント溶出 / 検量線 / 蒸発光散乱検出器 / 内部標準物質 / 高速液体クロマトグラフィー / 油脂 / 定量 / 異性体 / 液体クロマトグラフィー / 脂質栄養 / 構造脂質 |
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| 研究概要 |
本研究を基に、天然のトリグリセリド(TG)分子種の中でもとりわけ複雑な構造を有する魚油TG分子種の定量方法を確立した。その定量方法の分析条件を以下にまとめる。
一昨年までの研究で、魚油TG分子種の定量分析条件として、
・分析装置:高速液体クロマトグラフィー(HPLC)-紫外検出器(UV)装置(波長:210nm)
・カラム:トリアコンチルカラム(C30)のタンデム結合
・移動相:アセトニトリル(ACN)-アルコール(エタノールもしくは2-プロパノール)
・アイソクラティク溶出法
を確立した。この条件で得られる検量線は傾きが一次であり、この点が実用面で大きな長所となったはずであった。しかし、実際に使用すると、1)飽和脂肪酸を分子内に含むTG分子種において、検量線の傾きが小さくなること。2)一回の分析にかなりの時間を要する。などの欠点が問題となり、天然油脂中のTG分子種の定量には改良が必要となった。そこでグラディエント溶出法を用い、短時間で終了する分析条件の検討を行った。その結果、UVと蒸発光散乱検出器(ELSD)を直列に接続したHPLCで、内部標準物質(ジリノレン)を用いたグラディエント溶出法で、魚油TG分子種の分離が良好で、検量線が一次の傾きを示さないながらも再現性の高い検量線(相関係数が0.99以上の指数関数)を得ることが出来た。この分析条件を以下に示す。
・HPLC-UV-ELSD装置
・カラム:トリアコンチルカラム(C30)のタンデム結合
・移動相:ACN-2-プロパノール(IPA)溶出法
・グラディエント条件:Omin ACN : IPN=60:40→50min ACN : IPN=50:50→80min ACN : IPN=60:40→100min ACN : IPN=70:30→120min終了
・内部標準物質:ジリノレン
この条件を使用して、メバチマグロ、およびサクラマス体油中の主たるTG分子種の定量分析を行った。その結果、TG分子種の定量が行えることが判明した。さらに、これまで一般に、TG分子種の存在量を示すときに使用されてきたUVおよびELSDのクロマトグラム面積比と実際のTG存在量は必ずしも一致しないことが明らかとなった。これらのことより、各TG分子種の存在量を知るためには本研究で開発したTG分子種定量方法が有効な方法であると結論づけた。
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