| 研究概要 |
B細胞に於けるチロシンホスファクーゼSHP-1の機能を解析するため、新規基質の検索及びシグナル伝達機構の解析を行った。1)SHP-1の基質としてアクチンを同定し、アクチン内にITIM配列があることを明らかにした。GFPアクチン融合蛋白を用いて解析した結果、BCR刺激後アクチン重合が起こるが、SHP-1機能欠損株(C>S)に於いてはアクチンのチロシンリン酸化は恒常的に上昇し、時間の経過と共に起こるアクチンの脱重合が阻害されていた。この結果はアクチンのリン酸化が重合に、また脱リン酸化が脱重合に重要であることを示唆している。(J.Immunol,170(7):3762-8,2003)。2)同様に、SHP-1結合タンパク質としてMALDI-TOFにより同定したミオシンについて、合成ペプチドを用いて、SHP-1結合部位を同定し(ITIM配列)、BCR刺激後チロシンリン酸化されることを明らかにした(B.B.R.C.,304(1):67-72,2003)。3)SHP-1のB細胞に於ける基質の一つ、CD72の機能に付いて、CD72ホモログを欠損させたトリB細胞に変異体を導入し、解析した。その結果、SHP-1結合部位(ITIM1)変異体と、Grb2結合部位(ITIM2)変異体とではBCR刺激後のNF-κBの上昇に違いが認められ、それぞれの部位の機能に差があることを証明し、従来SHP-1との結合のみにて説明されていたCD72のネガティブシグナリングについて新たな知見を得た。またCD72が共受容体としてlipid raftに存在することを認め、それにはCD72の脂質修飾が重要であることを明らかにした(2003年日本免疫学会発表、投稿準備中)。またCD72欠損マウスの肺細胞をレトロウイルスにより不死化し、細胞株を樹立し、機能解析を行った(2003年日本免疫学会発表、投稿準備中)。
|
