| 研究課題/領域番号 |
14570376
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
公衆衛生学・健康科学
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| 研究機関 | 国立循環器病センター研究所 |
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研究代表者 |
池田 康行 国立循環器病センター研究所, 病因部, 室長 (90176107)
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| 研究分担者 |
高木 敦子 国立循環器病センター研究所, 薬理部, 室長 (90179416)
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| 研究期間 (年度) |
2002 – 2003
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| 研究課題ステータス |
完了 (2003年度)
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| 配分額 *注記 |
2,900千円 (直接経費: 2,900千円)
2003年度: 1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
2002年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
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| キーワード | リポ蛋白リパーゼ / 高トリグリセリド血症 / 動脈硬化 / 心疾患 / 遺伝子解析 / ヘテロ接合体 / 電気化学的アレイ / 高インシュリン血症 / IV型高脂血症 |
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| 研究概要 |
日本人に高頻度に認められる中程度の高トリグリセリド(TG)血症は、動脈硬化性心疾患の危険因子と考えられている。高TG血症は、リポ蛋白リパーゼ(LPL)遺伝子と肝性トリグリセリドリパーゼ遺伝子異常ヘテロ接合体の遺伝素因と環境因子(肝臓でのTG合成を亢進する因子:アルコール多飲や高インシュリン血症等)の負荷で発症する。それ故、LPL遺伝子異常ヘテロ接合体を早期診断することは、将来の動脈硬化症に対する予防医学に於いて重要な課題である。現在、我々によって検出・集積された日本人のLPL遺伝子変異は18種類である。この内、エキソン5のG188EとArita変異(916のG→deletion)、エキソン9のS447Xをモデル変異として選択して、遺伝子型を決定できる電気化学的アレイ(Electrochemical array:ECA)チップの開発を試みた。それぞれの変異を検出する為の変異プローブ(15mer)と対応する正常プローブ(15mer)を電極表面に固定化し、検出用電極として使用した。それぞれの変異を含むLPL遺伝子エキソン5および正常LPL遺伝子エキソン5のPCR産物を検出用電極とハイブリ後、縫い込み型FNDインターカレーターを含む0.25xSSC緩衝液中で、Differential Pulse Voltammetry (DPV)を行ない、遺伝子型を決定した。正常/正常のホモ接合体は、正常プローブ電極で、最大電流値を示し、変異/変異のホモ接合体は、変異プローブ電極で、最大電流値を示し、正常/変異のヘテロ接合体は、正常および変異プローブの両電極で、同程度の電流応答が得られた。確立したECAシステムを用いて、10例の検体に対してブラインドテストを行った結果、全例、遺伝子型を確定することが可能であった(研究成果は、Bioconjugate Chemistry,13:1193-1199,2002;Analytical Sciences,19:79-83,2003に発表)。
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