| 研究課題/領域番号 |
14570378
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(C)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 応募区分 | 一般 |
|---|
| 研究分野 |
法医学
|
|---|
| 研究機関 | 東北大学 |
|---|
研究代表者 |
那谷 雅之 東北大学, 大学院・医学系研究科, 助教授 (70241627)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2002 – 2003
|
| 研究課題ステータス |
完了 (2003年度)
|
| 配分額 *注記 |
2,300千円 (直接経費: 2,300千円)
2003年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
2002年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
|
|---|
| キーワード | allele specific TaqMan PCR法 / SYBR Green I / MN式血液型genotyping / ABO式血液型genotyping / MGBプローブ / TaqMan PCR法 / 融解曲線分析法 / ミスマッチプライマー / ABO式血液型 / genotying / 5'nuclease活性 / FAM / VIC / TaqMan-ASA法 / poly marker / 糖転移酵素cDNA / MN式血液型 |
|---|
| 研究概要 |
本研究において以下のような結果が得られた
1.親子鑑定・個人識別に繁用されている遺伝的多型poly marker検出システムPMキット(Applied Biosytems)で検出することのできるLDLR、GYPA、HBGG、D7S8、GCについてallele specific TaqManPCR法による検出法を構築した。各座位の塩基配列を基にプローブ、プライマーを設計し、PMキットの結果と比較しながら最適な組み合わせを選択した。SYBR Green Iを用いる変法においても各座位の判定を行うことができた。また、GYPAについてはプライマー及びプローブの部位を変えた系についても検討しMN式血液型genotyping法を構築した。
2.ABO式血液型糖転移酵素cDNAの261番の欠失の有無、703番、796番及び930番における塩基置換を識別できるMGBプローブを用いたTaqMan PCR法によるABO式血液型genotypingの系を構築することができた。
3.ABO式血液型糖転移酵素cDNAの261番における欠失の有無、796、803番の塩基置換について融解曲線分析による検出法を構築した。蛍光色素標識変異プローブと変異のない領域にハイブリする蛍光標識アンカープローブを混和し、反応液の温度を徐々に上昇させ、変異の有無による変異プローブの解離を蛍光強度モニタリングによって検出し、261番においてはAA・AO・OOを、796、803番においてはBB及びAB・BOを識別することができた。
4.ミスマッチプライマーを用いたMN式血液型genotypingについて検討した。M型にマッチしたprimerを設計し、PCRの立ち上がりのサイクル数の遅れを解析することにより、MM型、NN型、MN型を識別する系を構築した。NN型では反応が遅いサイクル数から立ち上がり、MM型、MN型明瞭に区別できた。MM型とMN型の立ち上がりの差は1サイクル程度であり、正確な判定のために、β-globinによる標準化を行ったところ、サンプル10ng当たりのコピー数の(GYPA/β-globin)値は、MN型では1前後、MN型では0.4前後となり、MM型、NN型、MN型を識別できた。更にGYPA遺伝子のexon2の22番目の塩基の置換を識別する融解曲線分析法によるMN式血液型genotyping法を構築することができた。
|
