| 研究課題/領域番号 |
14570487
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(C)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 応募区分 | 一般 |
|---|
| 研究分野 |
消化器内科学
|
|---|
| 研究機関 | 札幌医科大学 |
|---|
研究代表者 |
加藤 淳二 札幌医科大学, 医学部, 助教授 (20244345)
|
|---|
| 研究分担者 |
瀧本 理修 札幌医科大学, 医学部, 助手 (10336399)
新津 洋司郎 札幌医科大学, 医学部, 教授 (10045502)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2002 – 2003
|
| 研究課題ステータス |
完了 (2003年度)
|
| 配分額 *注記 |
3,500千円 (直接経費: 3,500千円)
2003年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
2002年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
|
|---|
| キーワード | HCV / HuH7 / TGF-α / HCV core / reporter assay / oxidative stress / Huh7 / 8-OHdG / HCV Core / Core |
|---|
| 研究概要 |
HCV core蛋白は細胞にoxidative stressを引き起こし、NF-kBなどの転写因子を活性化することが報告されているが、その下流の標的遺伝子は不明である。本研究では、genotype 1b型のHCV core蛋白の発現plasmid(pcHCV/core)をヒト肝癌細胞(HuH7)にリポフェクトアミンを用いてトランスフェクションした。G418 selection後、Core蛋白の発現をRT-PCR法ならびにウエスタンブロット法で確認した。HCV core蛋白を発現したHuh7細胞では、IkBのリン酸化・分解を伴った転写因子NF-κBの活性化が観察された。Core蛋白の導入によって、発現が変化した遺伝子群をcDNA microarray法で探索したところ、プロモーター領域にκB配列し増殖に関連する標的遺伝子候補としてTGF-αが見出された。そこで、TGF-αプロモーター領域をLuc遺伝子に連結しトランスフェクションしたところ、Core蛋白の発現量に依存してTGF-α転写が増加することを確認した。またHCV core蛋白を発現したHuh7では、親株に比べて、^3H-thymidineの取り込みが有意に亢進し、その効果はTGF-α抗体処理でキャンセルされた。以上の結果、HCV core蛋白は酸化ストレスを引き起こすとともにNF-κB依存性にオートクリン増殖因子としてTGF-αを産生させる作用があると考えられた。
|
