| 研究課題/領域番号 |
14570489
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
消化器内科学
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| 研究機関 | 名古屋市立大学 |
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研究代表者 |
佐々木 誠人 (2003) 名古屋市立大学, 大学院・医学研究科, 助手 (70360873)
横山 善文 (2002) 名古屋市立大学, 大学院・医学研究科, 助教授 (00145723)
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| 研究分担者 |
東山 繁樹 愛媛大学, 医学部, 教授 (60202272)
城 卓志 名古屋市立大学, 大学院・医学研究科, 助教授 (30231369)
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| 研究期間 (年度) |
2002 – 2003
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| 研究課題ステータス |
完了 (2003年度)
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| 配分額 *注記 |
3,000千円 (直接経費: 3,000千円)
2003年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
2002年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
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| キーワード | GPCR / ADAM / siRNA / 炎症性サイトカイン / shedding / EGFR ligsnds / IL-8 / IL-1β / EGFR ligand / shelding |
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| 研究概要 |
【目的】我々は、これまでGPCRのアゴニストであるIL-8が膜結合メタロプロテアーゼ(ADAM)の活性化を介してEGF受容体をリン酸化することを報告した。今回は、GPCRのアゴニストでないIL-1βも胃癌細胞のEGFRをリン酸化することを確認し、IL-8がどのADAMを介してEGFRをリン酸化するかを明らかにし、胃炎の病態に重要なサイトカイン(IL-1βとIL-8)によるEGFRの活性化機序の多様性を検討した。【方法】実験にはKATOIII細胞を用い、1-20ng/mlのIL-1βとIL-8で刺激した。EGFRの活性化はWestern blotで検討した。ADAM阻害は、KB-R7785を用いた。細胞膜から遊離されるEGFリガンドの定量のため、耐熱性アルカリフォスファターゼで標識したHB-EGF、AR、TGF-α前駆体の発現ベクターを調整し、これらを発現する細胞株を作製した。IL-1βとIL-8によるEGFリガンドが遊離されるメカニズムを解析した。siRNAにて、内因性ADAM10,12,17を欠失させ、IL-8によるEGFRリン酸化の有無を検討した。【結果】IL-1βでは刺激後、5分から4時間以上にわたる持続的なEGFRのリン酸化が見られたが、IL-8では一過性のリン酸化が見られた。EGFリガンドは、IL-1βとIL-8のいずれでも容量依存的にEGFリガンドを放出した。KB-R7785は、IL-8によるEGFリガンド放出とEGFRの活性化を阻害できたが、IL-1β刺激時は、阻害しなかった。ADAM10の欠失により、IL-8の刺激によるEGFRのリン酸化が抑制された。【結論】1.IL-1βとIL-8は、いずれもKATOIII細胞よりEGFリガンドを放出し、EGFRを活性化する。2.IL-1βは、IL-8と異なるADAM以外の因子を介しEGFリガンドを放出する。3.ADAM10がIL-8によるEGFRリン酸化に関与する。
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