| 研究課題/領域番号 |
14570518
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
消化器内科学
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| 研究機関 | 日本大学 |
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研究代表者 |
荒川 泰行 日本大学, 医学部, 教授 (50059698)
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| 研究期間 (年度) |
2002 – 2003
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| 研究課題ステータス |
完了 (2003年度)
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| 配分額 *注記 |
3,100千円 (直接経費: 3,100千円)
2003年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
2002年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
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| キーワード | EGF / プロファイリング / GADD45 / シグナル伝達 |
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| 研究概要 |
申請者らはAffymetrix社製GeneChip^R oligonucleotide microarrayを用いてマウス線維芽細胞(NIH3T3細胞)をEGFにて刺激した30分後に発現亢進する遺伝子群のプロファイリングを行い、EGF刺激により早期に発現量変化が生じる新たな遺伝子としてGADD45 gammaおよびGADD45 betaを同定した。そこで申請者らはEGF刺激によるGADD45 gammaおよびGADD45 beta遺伝子の発現調節機構の解明を試みている。
まず申請者はNIH3T3細胞をEGF(50および100ng/ml)にて刺激しGADD45(GADD45 alpha・beta・gamma)遺伝子および蛋白発現量についてRT-PCR法・RNase protection assayおよびWestern blot法にて検討を行った。EGF刺激の約30分後からGADD45 alpha/ gamma mRNA・蛋白発現量増加を認めたが、GADD45 beta mRNA・蛋白は約15分後より発現量低下を認めた。MAP kinase(MAPK)/Extracellular signal-regulated kinase(ERK)の活性化の関与を確認するためMEK阻害剤(PD98059:20μM)を添加した場合は、いずれのGADD45遺伝子・蛋白群も発現量変化を認めなかった。
次に申請者はEGF刺激によるGADD45遺伝子の発現量変化に伴うJNK・p38 MAP kinase経路の活性化について検討を行った。EGF(100ng/ml)にて刺激したNIH3T3細胞の抽出蛋白からJNKおよびp38 MAP kinaseを特異的抗体にて免疫沈降し、in vitro kinase assayを行った。EGF投与15分後においてJNK活性化(約2.2倍)を認めたが、同30-120分後ではJNK活性化は認めなかった。p38 MAP kinaseについてはEGF投与0-120分後において活性に変化を認めなかった。申請者はJNK活性とGADD45 betaの関係に注目し、以下の実験を行った。GADD45 beta-siRNAを発現導入したNIH3T3細胞をEGF(100ng/ml)にて刺激しJNK活性化を検討したところ、EGF投与0-60分後において著明なJNK活性化(約3-6倍)を認めた。以上の結果より、EGF刺激におけるJNK活性化についてはGADD45 betaの発現量低下が関与する可能性が考えられた。
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