| 研究概要 |
目的:脳虚血ではプロモーター領域にHIF(hypoxia inducible factor)-1のコンセンサス・エレメントであるHRE(hypoxia-responsive enhancer)を有するiNOSが発現することが知られている.そこでHIF-1のHREへの結合能が,虚血後iNOS発現部位で亢進するか否かを検討した.
材料および方法:ラット2時間中大脳動脈閉塞モデルを用い,虚血脳から核蛋白の抽出を行い,核蛋白のHRE結合能の変化を,iNOS遺伝子の5-flanking regionに存在するHRE配列を有するオリゴヌクレオチドを用いEMSAにより調べた.また,虚血巣を含む虚血側および対側におけるiNOSの発現のタイムコースをRT-PCRにより調べた.さらに,灌流固定脳のパラフィン切片において,脳内各部位のどのような細胞にiNOS蛋白が発現しているのかを調べた.
結果:虚血1時間後には,虚血中心部およびその周辺でinducible HIF結合能が増加した.6時間後には,対側においてもinducible HIF-1結合能の増加も認められた.HIF-1結合能の増加は虚血周辺部では24時間後まで持続したが,中心部では消失した.iNOS mRNAの発現は,虚血12-48時間後に強く認められた.iNOS蛋白の発現は,虚血巣内の周辺部あるいは血管周囲の多核白血球および血管壁(内皮および平滑筋細胞)に認められた.
結論:虚血後のHIF-1のHRE結合能の変化とiNOS発現は完全には一致せず,虚血中心部のenergy failureやIRF-1やNFκBなどの他の転写因子の関与が示唆された.
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