| 研究課題/領域番号 |
14570652
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(C)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 応募区分 | 一般 |
|---|
| 研究分野 |
循環器内科学
|
|---|
| 研究機関 | 浜松医科大学 |
|---|
研究代表者 |
渡邉 裕司 国立大学法人浜松医科大学, 医学部, 教授 (50262803)
|
|---|
| 研究分担者 |
加藤 秀樹 国立大学法人浜松医科大学, 医学部, 助手 (80314029)
佐藤 洋 国立大学法人浜松医科大学, 医学部附属病院, 助手 (30293632)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2002 – 2004
|
| 研究課題ステータス |
完了 (2004年度)
|
| 配分額 *注記 |
3,400千円 (直接経費: 3,400千円)
2004年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
2003年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
2002年度: 2,400千円 (直接経費: 2,400千円)
|
|---|
| キーワード | アポトーシス / 血管内皮細胞 / カルシウム / 小胞体ストレス / カスパーゼ / Akt / PI3キナーゼ |
|---|
| 研究概要 |
【目的】前年度研究において、血管内皮細胞におけるアポトーシスの出現には、細胞内Ca濃度の上昇よりも、小胞体内のCa枯渇が重要であること。また、Caspase-12(C-12)非依存的なアポトーシスシグナル経路が存在することが示唆された。平成16年度研究では、caspase inhibitorとcalpain inhibitorを用い、thapsigargin刺激時およびBAPTA/AM(20μM)で前処置しBK刺激を行った際に生じるアポトーシスについて検討した。
【方法】細胞内Ca濃度はfra-2/AM負荷法を測定した。アポトーシスはDNA Ladder法を、C-12の活性化はWestern blotting法を用いて判定した。
【成績】Calpain inhibitorであるMDL28170(120μM)存在下で、thapsigargin(2μM)投与時のC-12の活性化は抑制されたが、アポトーシスは出現した。非選択的なcaspase inhibitorであるzVAD-fmk(100μM)存在下で、thapsigargin投与時のC-12の活性化とアポトーシスはともに抑制された。また、BAPTA/AM(20μM)の前処置下でBK刺激を行った際に生じるC-12非依存的なアポトーシスもzVAD-fmk(100μM)は抑制した。
【結論】1)C-12によるアポトーシスシグナル経路の上流にはcalpainが位置し、2)thapsigarginによるアポトーシスの出現には、C-12依存的な経路と、caspase依存的ではあるがC-12非依存的な経路が存在すること、3)小胞体Ca枯渇によって生じるアポトーシスは、caspase依存的ではあるがC-12非依存的なシグナル経路を介することが示唆された。
|
