ゼブラフィッシュを用いた先天性造血障害および免疫不全モデルの作成とその遺伝子解析

• 研究課題/領域番号: 14570783
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 小児科学
• 研究機関: 東京大学 (2003-2005); 関西医科大学 (2002)
• 研究代表者: 河崎 裕英 東京大学, 医科学研究所, 助手 (80278621)
• 研究分担者: 国府寺 美 関西医科大学, 医学部, 助手 (90198614) ; 中野 崇秀 関西医科大学, 医学部, 助手 (40333207)
• 研究期間 (年度): 2002 – 2005
• 研究課題ステータス: 完了 (2005年度)
• 配分額: 2,800千円 (直接経費: 2,800千円); 2005年度: 600千円 (直接経費: 600千円); 2004年度: 600千円 (直接経費: 600千円); 2003年度: 600千円 (直接経費: 600千円); 2002年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
• キーワード: ゼブラフィッシュ / 先天性造血障害 / 先天性免疫不全症 / in situ hybridization / ikaros / 先天性免疫不全

研究概要

ゼブラフイッシュ研究用の水槽タンクと自動環流システムを研究室内に設置し、先天性造血障害や免疫不全のゼブラフィッシュモデルを製作を試みた。点突然変異を誘発することが知られているN-ethyl-N-nitrosourea(ENU)処理を雄に行い、その雄と野生型の雌とを交配し、ヘテロ接合体の雑種第一代(F1)を作成した。F1の雌から取り出した無受精の卵に、紫外線処理をしDNAを不活性化した精子をかけ、フレンチプレッシャーにて圧をかけるという偽受精・高圧処理を行い単為発生を誘発した。上記処理4日後に幼魚をアルコール固定し、赤血球系に発現するヘモグロビンとリンパ球系に発現するrag1の遺伝子プローブを用いたwhole embryo in situ hybridizationを行い突然変異の有無を調べた。野生型におけるwhole embryo in situ hybridizationではヘモグロビンは心血管系に、rag-1は胸腺に発現するが、それらの発現に異常が観察されたものを突然変異体と考える。心血管系と胸腺ともに遺伝子発現のみられないヘモグロビン(-)/rag1(-)の表現型持つものを造血幹細胞の発生に異常があるもの、胸腺のみに発現のみられるヘモグロビン(-)/rag1(+)のものを赤血球系の発生に異常があるもの、心血管系のみに発現のみられるヘモグロビン(+)/rag1(-)のものをリンパ球系の発生に異常があるものと考える。その結果、F1の215個体から36個体の突然変異が得られた。内訳は、リンパ球系の発生に異常があるヘモグロビン(+)/rag1(-)の19個体、赤血球系の発生に異常があるヘモグロビン(-)/rag1(+)の14個体、造血幹細胞の発生に異常があるヘモグロビン(-)/rag1(-)の3個体であった。

研究成果

• [雑誌論文] RAS-blocking bisphosphonate zoledronic acid inhibits the abnormal proliferation and differentiation of juvenile myelomonocytic leukemia cells in vitro. (2005)
  • 著者名/発表者名: Yoshitoshi Ohtsuka, Atsushi Manage, Hirohide Kawasaki et al.
  • 雑誌名: Blood 106 ページ: 3134-3141
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Methylation statusof the P15 and p16 genes in paediatric myelodysplastic syndrome and juvenile myelomonocytic leukaemia. (2005)
  • 著者名/発表者名: Daisuke Hasegawa, Atsushi Manabe, Takeo Kubota, Hirohide Kawasaki et al.
  • 雑誌名: British Journal of Haematology 128 ページ: 805-812
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] RAS-blocking bisphosphonate zoledronic acid inhibits the abnormal proliferation and differentiation of juvenile myelomonocytic leukemia cells in vitro. (2005)
  • 著者名/発表者名: Yoshitoshi Ohtsuka, Atsushi Manabe, Hirohide Kawasaki, Daisuke Hasegawa, Yuji Zaike, Sumiko Watanabe, Takakuni Tanizawa, Tatsutoshi Nakahata, Kohichiro Tsuji
  • 雑誌名: Blood 106 ページ: 3134-3141
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Methylation status of the p15 and p16 genes in paediatric myelodysplastic syndrome and juvenile myelomonocytic leukaemia. (2005)
  • 著者名/発表者名: Hasegawa, Atsushi Manabe, Takeo Kubota, Hirohide Kawasaki, Imiko Hirose, Yoshitoshi Ohtsuka, Toshihisa Tsuruta, Yasuhiro Ebihara, Yu-ichi Goto, Xiao Yan Zhao, Kazuo Sakashita, Kenichi Koike, Mariko Isomura, Seiji Kojima, Akinori Hoshika, Kohichiro Tsuji, Tatsutoshi Nakahata
  • 雑誌名: British Journal of Haematology 128(6) ページ: 805-812
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] RAS-blocking bisphosphonate zoledronic acid inhibits the abnormal proliferation and differentiation of juvenile myelomonocytic leukemia cells in vitro. (2005)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuka Y, Manabe A, Kawasaki H, et al.
  • 雑誌名: Blood 印刷中
• [雑誌論文] Methylation status of the p15 and p16 genes in paediatric myelodysplastic syndrome and juvenile myelomonocytic leukaemia. (2005)
  • 著者名/発表者名: Hasegawa D, Manabe A, Kubota T, Kawasaki H, et al.
  • 雑誌名: British Journal of Haematology 128・6 ページ: 805-812
• [雑誌論文] Methylation status of the p15 and p16 genes in paediatric myelodysplastic syndrome and juvenile myelomonocytic leukaemia. (2005)
  • 著者名/発表者名: Hasegawa D, Manabe A, Kubota T, Kawasaki H, et al.
  • 雑誌名: British Journal of Haematology (印刷中)
• [雑誌論文] 後天性サイトメガロ感染症に合併した免疫学的血小板減少性紫斑病 (2004)
  • 著者名/発表者名: 河崎裕英, 他
  • 雑誌名: 日本小児血液学会雑誌 18・5 ページ: 561-565
• [雑誌論文] CD7/CD13陽性急性分類不能型白血病 (2004)
  • 著者名/発表者名: 長谷川大輔, 真部淳, 鶴田敏久, 大塚欣敏, 海老原康博, 河崎裕英, 他
  • 雑誌名: 日本小児血液学会雑誌 18・3 ページ: 155-159
  • NAID: 10013306100
• [雑誌論文] The effect of thrombopoietin on erythroid progenitors in Diamond-Blackfan anemia. (2002)
  • 著者名/発表者名: Hirohide Kawasaki, et al.
  • 雑誌名: International Journal of Hematology 75・4 ページ: 382-384
  • NAID: 10008451485
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] The effect of thrombopoietin on erythroid progenitors in Diamond-Blackfan anemia. (2002)
  • 著者名/発表者名: Hirohide Kawasaki, Takahide Nakano, Urara Kohdera, Yohnosuke Kobayashi
  • 雑誌名: International Journal of Hematology 75(4) ページ: 382-384
  • NAID: 10008451485
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Ikaros expression as a marker for lymphoid progenitors during zebrafish development. (2001)
  • 著者名/発表者名: Willett CE, Kawasaki H, et al.
  • 雑誌名: Developmental Dynamics 222・4 ページ: 694-698
• [文献書誌] Hirohide Kawasaki, et al.: "The effect of thrombopoietin on erythroid progenitors in Diamond-Blackfan anemia."International Journal of Hematology. 75・4. 382-384 (2002)
• [文献書誌] Hirohide Kawasaki, et al.: "The effect of thrombopoietin on erythroid progenitors in Diamond-Blackfan anemia"International Journal of Hematology. 75・4. 382-384 (2002)