| 研究概要 |
我々はこれまで神経冠細胞(neural crest cells,以下NCC)培養系を使い、メラノサイト前駆細胞の増殖分化に関わる因子を検討し、報告してきた。TGFβ(Transforming Growth Factorβ)スーパーファミリーは、TGFβやBMP(Bone Morpllogenetic Protein)などが含まれ、生体の発生や形態形成に重要な役割をする。一方、SCFはチロシンカイネースレセプターであるKITを介して作用する。このSCF/KIT伝達系の働きは、皮膚メラノサイト発生や分化増殖過程に必要不可欠であり、それが阻害されるとin vitroでは細胞死を起こしてしまう。また、NCC培養系や幼若メラノサイトであるNCCmelb4細胞で、特にTGFβ1が、メラノサイトの増殖分化過程に大きく関与することを証明した。このNCCmelb4細胞株から、KIT陰性のcell line, NCCmelb4M5細胞株を当教室で樹立した。NCCmelb4はKIT,チロシナーゼ関連蛋白陽性であるが、チロシナーゼ、ETRB、DOPA反応は陰性を呈する。この細胞を継代維持する培養液にはSCFが添加されているが、SCF無添加で継代したところ一代目は半数が死滅し、残った細胞も増殖速度が低下した。しかし代を追うごとに増殖速度が回復し、SCF無添加で継代維持可能となった。形態は大きく変化し、NCCmelb4は紡錘形と多角形が混在するが、NCCmelb4M5は殆ど多角形を示した。NCCmelb4がKIT陽性なのに比しNCCmelb4M5は陰性を呈し、TRP-1、TRP-2陽性で、チロシナーゼ、ETRB、DoPA反応は陰性であった。以上より、NCCmelb4M5は、NCCmelb4よりさらに幼若なメラノブラストと推測される。すなわち、NCCmelb4M5株は最も幼弱なメラノサイトであり、移動することのない神経上皮細胞から活発に移動するNCC細胞(後のメラノサイト)への最初の段階といえる。Alamar Blue法を用いた細胞増殖能の検索にてNCCmelb4M5株はBMP4の添加で増殖が有意に抑制され、BMPのアンタゴニストであるNogginの大量添加で、この抑制は完全に回復した。すなわち、BMP4が、NCCmelb4M5株に大きな影響を及ぼすサイトカインであると思われる。さらに蛋白レベルとmRNAレベルにて、この変化がKIT発現と関連していることを確認している。
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