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乳癌細胞におけるオーファン受容体SXRを介した標的遺伝子の同定

研究課題

研究課題/領域番号 14571079
研究種目

基盤研究(C)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 内分泌学
研究機関(財)冲中記念成人病研究所

研究代表者

竹下 章  (財)冲中記念成人病研究所, 研究員 (20322646)

研究分担者 小澤 安則  (財)冲中記念成人病研究所, 研究員 (10124306)
田口 学  (財)冲中記念成人病研究所, 研究員 (00265141)
研究期間 (年度) 2002 – 2004
研究課題ステータス 完了 (2004年度)
配分額 *注記
2,600千円 (直接経費: 2,600千円)
2004年度: 600千円 (直接経費: 600千円)
2003年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
2002年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
キーワード多剤耐性 / SXR / MDR1 / コリプレッサー / コアクティベーター / ドミナントネガティブ / SRC-1 / SMRT / コレプレッサー / 乳癌 / DEHP / 内分泌撹乱物質 / ポリ塩化ビニル
研究概要

はじめに)癌細胞が多剤耐性を獲得する機序のひとつにMDR1遺伝子の高発現がある。MDR1遺伝子は核内受容体SXRにより発現調整され、パクリタキセルなどの抗癌剤やリファンピシン(RFP)はSXRにリガンドとして結合しMDR1発現を増加する。変異核内受容体には正常受容体の機能を阻止するドミナントネガティブ作用があるが、本研究では1)変異SXRの作成と機能解析、2)癌細胞に変異SXRを過剰発現させ内因性SXRの機能を阻害しMDR1発現が抑制されるかを検討し多剤耐性に対する遺伝子治療の可能性を探る。
方法)434アミノ酸SXRのC端13個を欠損した変異SXR(MUT-SXR)、野生型SXR(WT-SXR)、MDR1プロモーター領域を組み込んだMDR1-TK-LUCレポーターをCV1細胞にトランスフェクトしレポーターアッセイをおこなった。リアルタイムPCRによるMDR1 mRNA測定を乳癌細胞株MCF7細胞と大腸癌細胞株LS174T細胞を用いておこなった。LS174T細胞にMUT-SXRを過剰発現させた安定細胞株を作成した。
結果)レポーターアッセイでRFP刺激によるWTの転写活性化はMUTにより抑制された。このドミナントネガティブ効果の機序を知るため2-ハイブリッド法によりcoactivator (SRC-1)やcorepressor (NCoR, SMRT)とSXRの結合を検討した。SRC-1はWTとRFP依存症に結合したが、MUTとは結合しなかった。一方CoRやSMRTはWTに比してMUTとより強く結合した。リアルタイムPCRによるMDR1 mRNA定量ではLS174T細胞でMDR1 mRNAがRFP依存症に約5倍増加した(10μM)がMCF7細胞では著変なかった。LS174T細胞にMUT-SXRを過剰発現させた安定細胞株を作成した。現在リアルタイムPCRでMDR1遺伝子発現を検討中である。

報告書

(4件)
  • 2004 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 2003 実績報告書
  • 2002 実績報告書
  • 研究成果

    (8件)

すべて 2004 2002 その他

すべて 雑誌論文 (3件) 文献書誌 (5件)

  • [雑誌論文] Polychlorinated biphenyls suppress thyroid hormone receptor-mediated transcription through a novel mechanism.2004

    • 著者名/発表者名
      Miyazaki W et al.
    • 雑誌名

      J Biol Chem 279(18)

      ページ: 18195-18202

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 実績報告書 2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Putative role of the orphan nuclear receptor SXR (steroid and xenobiotic receptor) in the mechanism of CYP3A4 inhibition by xenobiotics.2002

    • 著者名/発表者名
      Takeshita A et al.
    • 雑誌名

      J Biol Chem 277(36)

      ページ: 32453-32458

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 実績報告書 2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Polychlorinated biphenyls suppress thyroid hormone-induced transactivation.2002

    • 著者名/発表者名
      Iwasaki T et al.
    • 雑誌名

      Biochem Biophys Res Commun 299(3)

      ページ: 384-388

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 実績報告書 2004 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Akira Takeshita et al.: "Putative role of the orphan nuclear receptor SXR (steroid and xenobiotic receptor) in the mechanism of CYP3A4 inhibition by xenobiotics."The Journal of Biological Chemistry. 277・36. 32453-32458 (2002)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Toshiharu Iwasaki et al.: "Polychiorinated biphenyls suppress thyroid hormone-induced transactivation."Biochemical and Biophysical Research Communications. 299・3. 384-388 (2002)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Wataru Miyazaki et al.: "Polychiorinated biphenyls (PCBs) suppress thyroid hormone (TH) receptor (TR)-mediated transcription through a novel mechanism"The Journal of Biological Chemistry. (発表予定). (2004)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Akira Takeshita et al.: "Putative role of the orphan nuclear receptor SXR (steroid and xenobiotic receptor) in the mechanism of CYP3A4 inhibition by xenobiotics"The Journal of Biological Chemistry. 277・36. 32453-32458 (2002)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書
  • [文献書誌] Toshiharu Iwasaki et al.: "Polychiorinated biphenyls suppress thyroid hormone-induced transactivation"Biochemical and Biophysical Research Communications. 299・3. 384-388 (2002)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書

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公開日: 2002-04-01   更新日: 2016-04-21  

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