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ストレス蛋白-ヒト癌抗原ペプチド融合蛋白を用いた癌ワクチンの開発

研究課題

研究課題/領域番号 14571146
研究種目

基盤研究(C)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 外科学一般
研究機関長崎大学

研究代表者

永田 康浩  長崎大学, 医学部・歯学部附属病院, 助手 (80336164)

研究分担者 兼松 隆之  長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (40128004)
鵜殿 平一郎  長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教授 (50260659)
研究期間 (年度) 2002 – 2003
研究課題ステータス 完了 (2003年度)
配分額 *注記
3,500千円 (直接経費: 3,500千円)
2003年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
2002年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
キーワードストレス蛋白 / 癌ワクチン / NY-ESO-1 / 樹状細胞 / hsc70
研究概要

ストレス蛋白hsc70の抗腫瘍効果についてはこれまで須藤,鵜殿,Srivastavaらにより動物モデル(マウス)において示されてきた.近年,hsc70特異的受容体が同定され,hsc70に関わる抗原提示のメカニズムが明らかにされつつある.それにともないhsc70を用いた癌ワクチンの臨床応用に対する期待が高まっている.しかしこれまでの研究の多くがマウスにおけるものであり,ヒトの癌抗原システムにおける詳細な解析は行われていない.今回,我々はヒト癌抗原として同定されたNY-ESO-1抗原決定基とhsc70の融合蛋白で抗原提示細胞(樹状細胞)を感作し、NY-ESO-1抗原決定基が樹状細胞のMHC class I上へ提示されることをNY-ESO-1特異的細胞傷害性T細胞によって証明した.
1.癌抗原とhsc70の融合蛋白の作製
健常人末梢血からtotal RNAを抽出した.RNAからRT-PCRによりhsc70のcDNAを得た.5'末端および3'末端のどちらか一方にNY-ESO-1の抗原決定基を含むプライマーを用いてcDNAを増幅し,NY-ESO-1とhsc70の融合遺伝子を作製した.融合遺伝子を発現ベクター(pQE31)に組み込み.さらに大腸菌(M15株)に導入しNY-ESO-1とhsc70の融合蛋白を発現させた.融合蛋白は菌体を破砕して抽出した後,さらに核酸・エンドトキシン除去(Kurimover)も併用して精製を行った.
2.抗原提示細胞(樹状細胞)の誘導
樹状細胞は,健常人末梢血単核球から単球を分離し,IL-4,GM-CSF存在下(各々1000U/ml)で5日間培養して誘導した.誘導された樹状細胞の細胞表面マーカーはFlow cytometryにより確認した.
3.融合蛋白由来抗原エピトープの提示
NY-ESO-1とhsc70の融合蛋白を用いて抗原提示細胞(樹状細胞)を感作した.さらに,感作された樹状細胞をNY-ESO-1抗原特異的細胞傷害性T細胞(Clone5)と共培養し,Clone5からのIFN-γ産生をELISPOT assayにより確認した.
今後は,樹状細胞上のhsc70特異的受容体の同定を含めた抗原提示経路の解明が必要である.

報告書

(3件)
  • 2003 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 2002 実績報告書
  • 研究成果

    (15件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (15件)

  • [文献書誌] Nagata Y, Ono S, 他: "Differential presentation of a soluble exogenous tumor antigen, NY-ESO-1,by distinct human dendritic cell populations."Proc Natl Acad Sci USA. 99・16. 10629-10643 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Gnjatic S, Hike J, 他: "CD8(+) T cell responses against a dominant cryptic HLA-A2 epitope after NY-ESO-1 peptide immunization of cancer patients."Proc Natl Acad Sci USA. 99・18. 11813-11818 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Yamano T, Murata S, 他: "Two distinct pathways mediated by PA28 and hsp90 in major histocompatibility complex class I antigen processing."J Exp Med.. 196・2. 185-196 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Tominaga N, Ohkusu-Tsukada K, 他: "Development of Th1 and Th2 immune responses in mice lacking interferon regulatory factor-4."Int.Immunol.. 15. 1-10 (2003)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Udono H, Saito T, 他: "Hsp-antigen fusion and their use for immunization."Methods.. 32・1. 21-24 (2004)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nagata Y, et al.: "Differential presentation of a soluble exogenous tumor antigen, NY ESO-l, by distinct human dendritic cell nonulations."Proc Natl Acad Sci USA. 99(16). 10629-10634 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Gnjatic S, et al.: "CD8(+) T cell responses against a dominant cryptc 1-ILA-A2 epitope after NY ESO-1 peptide immunization of cancer patients."Proc Natl Acad Sci USA. 99(18). 11813-11818 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Yamano T, et al.: "Two distinct pathway mediated by PA28 and hsp90 in major histocompatibility complex class I antigen processing."J.ExMed.. 196. 185-196 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Tominaga N, et al.: "Development of Th1 and Th2 immune responses in mice lacking interferon regulatory factor-4."Int.Immuuol.. 15. 1-10 (2003)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Udono H, et al.: "Hsp-antigen fusion and their use for immunization."Methods.. June 32(1). 21-24 (2004)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nagata Y, Satoru O, Mitsutoshi M: "Differential presentation of a soluble exogenous tumor antigen, NY-ESO-1, by distinct human dendritic cell populations"Proc Natl Acad Sci USA. 196・2. 10629-10643 (2002)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Yamano T, Murata S, Shimbara N, Tanaka N, Chiba T, Tanaka K, Yui K, Udono H: "Two distinct pathways mediated by PA28 and hsp90 in major histocompatibility complex class I antigen processing"J Exp Med. 196・2. 185-196 (2002)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Udono H, Saito T, Ogawa M, Yui Y: "Hsp-antigen fusion and their use for immunization"Methods. 32・1. 21-24 (2004)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Yasuhiro Nagata et al.: "Differential presentation of a soluble exogenous tumor antigen, NY-ESO-1, by distinct human dendreitc cell populations"Proceedings of the National Academy of Sciences. Vol.99 No.16. 10629-10634 (2002)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書
  • [文献書誌] Taketoshi Yamano, Heiichiro Udono et al.: "Two Disitinct Pathways Mediated by PA28 and hsp90 in Major Histocompatibility Complex Class I Antigen Precessing"The Journal of Experimental Medicine. Volume 196 Number 2. 185-196 (2002)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書

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公開日: 2002-04-01   更新日: 2016-04-21  

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