アンドロゲン非依存性前立腺癌におけるアンドロゲン受容体(AR)の動態的機能解析

• 研究課題/領域番号: 14571514
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 泌尿器科学
• 研究機関: 京都府立医科大学
• 研究代表者: 浮村 理 京都府立医科大学, 医学研究科, 助手 (70275220)
• 研究分担者: 河内 明宏 京都府立医科大学, 医学研究科, 助教授 (90240952) ; 三木 恒治 京都府立医科大学, 医学研究科, 教授 (10243239) ; 河田 光博 京都府立医科大学, 医学研究科, 教授 (60112512) ; 野本 剛史 京都府立医科大学, 医学研究科, 助手 (20301426) ; 水谷 陽一 京都府立医科大学, 医学研究科, 講師 (10243031)
• 研究期間 (年度): 2002 – 2003
• 研究課題ステータス: 完了 (2003年度)
• 配分額: 3,900千円 (直接経費: 3,900千円); 2003年度: 800千円 (直接経費: 800千円); 2002年度: 3,100千円 (直接経費: 3,100千円)
• キーワード: 前立腺癌 / アンドロゲン受容体 / green flouescent protein / アンドロゲン非依存性前立腺癌 / green fluorescent protein

研究概要

テストステロン添加前コントロールであるCOS-1細胞における導入したARは核内には存在せず,細胞質にのみその染色性を認めた.10^<-6>Mテストステロン添加により.外因性ARは細胞質より核内に移行していた.LNCaP細胞における内在性ARは細胞質のみならず核内にもその局在を示した.テストステロン添加により,COS-1細胞と同様に核内に移行していた.さらに、内因性のARの存在とその局在を検討するために、抗AR抗体を用いて免疫細胞学的検討を行った.AR-GFP(ARのc末端側にGFPを融合)とLNCaP細胞内に存在するARに見られるT877Aの点変異を加えたAR(T877A)-GFPを発現するプラスミドを作成し,点変異がARの動態に及ぼす効果を検討するため,Effectene Transfection Reagent(QIAGEN)を用いて各々の細胞に導入し融合タンパクを発現させ、共焦点顕微鏡(LSM510,CarlZeiss, Inc. Germany)を用いて,細胞内における動態を解析した.AR-GFPを発現させたCOS-1細胞とLNCaP細胞の比較検討では.テストステロン添加前は免疫組織学的検討と同様に、COS-1細胞では細胞質のみ局在を認めLNCaP細胞では核内にも局在を認めた.10^<-6>Mテストステロン添加により.それぞれ速やかに核内に移行しdotを形成した.その核内移行のパターンには明らかな差異を認めなかった.AR(T877A)-GFPをそれぞれの細胞に発現させた比較検討では,テストステロン添加前のCOS-1細胞においてLNCaP細胞と同様に核内にも局在を認めた.さらに、AR-GFPの動態はCOS-1細胞では変化が見られなかったが,LNCaP細胞では核内移行しdotを形成した.AR(T877A)-GFPもAR-GFPと同様の動態を認めた.