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遺伝子導入によるRCSラットの網膜変性の改善:網膜色素上皮に特異的に発現するウイルスによるアプローチ

研究課題

研究課題/領域番号 14571677
研究種目

基盤研究(C)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 眼科学
研究機関佐賀大学(医学部)

研究代表者

小林 博  佐賀大学, 医学部, 助教授 (00215360)

研究分担者 小林 かおり  佐賀大学, 医学部, 講師 (60325595)
中林 條  佐賀医科大学, 医学部, 助手 (10315202)
研究期間 (年度) 2002 – 2003
研究課題ステータス 完了 (2003年度)
配分額 *注記
4,000千円 (直接経費: 4,000千円)
2003年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
2002年度: 2,300千円 (直接経費: 2,300千円)
キーワード網膜色素上皮細胞 / siRNA / サイレシング / pP344 / セリンプロテアーゼインヒビター / 免疫組織化学法 / ウエスタンブロット法
研究概要

網膜色素上皮に特異的に発現するプロモーターを持つdelivery system(伝達方法)の開発として、pp344プロモーターを組み込んだ非病原性ウイルスを利用することが妥当と考えられる。pp344プロモーター領域を単離とともに、pp344遺伝子産物の特性を調べることも重要と考えられたので、我々はニワトリpp344タンパク質に対する抗体を作製し、眼内における分布を検討した。免疫組織化学法では、ニワトリ胚においては網膜色素上皮および、神経網膜全域に抗体による染色がみられ、マウスでは、網膜色素上皮、網膜視細胞層から神経節細胞層に及んで染色が認められた。ウエスタンブロット法では、ニワトリ胚網膜色素上皮及び神経網膜において、65kDaの部位にバンドが検出された。pP344遺伝子産物は、網膜色素上皮細胞から神経網膜に存在することが示された。pP344遺伝子産物は網膜に分泌されることから、網膜における機能の解明が重要と考えられた。初年度に引き続き、網膜色素上皮における遺伝子発現を制御する方法を検討してきた。RNAiは、配列特異的にmRNAが分解され、その結果遺伝子の配列が抑制される現象であり、哺乳動物細胞への適用も広まっている。今回、々は、RNAiの試行にsiRNAとして知られる21bpのdsRNAフラグメントを用い、遺伝子発現を抑制した。網膜色素上皮細胞の分化転換系においてMitfが重要な役割を示すことは知られている。siRNAを用いてMitf遺伝子の発現を抑制し、形質転換に伴うmmp115タンパク質の発現変化を検討した。84.6の培養胚網膜色素上皮細胞に蛍光標識siRNAが導入された。Mitf遺伝子siRNAトランスフェクション48時間後にMitfの発現が75.0%抑制された。Mitf遺伝子siRNA導入により、脱分化した培養網膜色素上皮細胞が増加し、mmp115の発現が抑制された。今後さらに網膜色素上皮の遺伝子発現を制御するシステムを検討し、網膜色素変性疾患の治療に結び付けていきたい。

報告書

(3件)
  • 2003 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 2002 実績報告書
  • 研究成果

    (11件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (11件)

  • [文献書誌] Kobayashi K, Iwakiri R, Kobayashi H, Okinami S: "Expression of estrogen receptor alpha and 17beta-hydroxysteroid dehydrogenase 4 in the ciliary body"Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol.. 242. 172-176 (2004)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Iwakiri R, Kobayashi K, Kobayashi H, Okiami S: "Distribution of a retinal pigment epithelium-specific gene product in chick embryo and mouse eyes"Invest Ophthalmol Vis Sci. 44. s58 (2003)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kobayashi K, Iwakiri R, Kobayashi H, Okinami S: "Expression of matrix metalloproteinase-3 in the sclera an trabecular meshwork of glaucoma patients with uveitis"Invest Ophthalmol Vis Sci. 44. S16 (2003)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Iwakiri R, Kobayashi K, Kobayashi H: "Functional characterization of the retinal pigment epithlium-specific gene product PP344 on neural retinal cells"Invest Ophthalmol Vis Sci. 45. S54 (2004)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kobayashi K, Iwakiri R, Kobayashi H: "Functional inhibition of Mitf in retinal pigment epithelium by small interfering RNA"Invest Ophthalmol Vis Sci. 45. S199 (2004)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Iwakiri R, Kobayashi K, Kobayashi H, Okinami S.: "Distribution of a retinal pigment epithelium-specific gene product in chick embryo and mouse eyes."Invest Ophthalnmol Vis Sci. 44. s58 (2003)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kobayashi K, Iwakiri R, Kobayashi H, Okinami S.: "Expression of matrix metalloproteinase-3 in the sclera an trabecular meshwork of glaucoma patients with uveits."Invest Ophthalnmol Vis Sci. 44. s16 (2003)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Iwakiri R, Kobayashi K, Kobayashi H.: "Functional characterization of the retinal pigment epithelium-specific gene product PP344 on neural retinal cells."Invest Ophthalnmol Vis Sci. 45. s16 (2004)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kobayashi K, Iwakiri R, Kobayashi H.: "Functional inhibition of Mitf in retinal pigment epithelium by small interfering RNA."Invest Ophthalnmol Vis Sci. 45. s16 (2004)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kobayashi K, Iwakiri R, Kobayashi H, Okinami S.: "Expression of estrogen receptor alpha and 17beta-hydroxysteroid dehydrogenase 4 in the ciliaiy body."Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 242 Epub 2003 Nov 21.. 172-176 (2004)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2003 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kobayashi K, Iwakiri R, Kobayashi H, Okinami S: "Expression of estrogen receptor alpha and 17beta-hydroxysteroid dehydrogenase 4 in the ciliary body"Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol.. 242. 172-176 (2004)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書

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公開日: 2002-04-01   更新日: 2016-04-21  

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