| 研究課題/領域番号 |
14571699
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
小児外科学
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| 研究機関 | 千葉大学 |
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研究代表者 |
幸地 克憲 千葉大学, 医学部附属病院, 助手 (40312938)
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| 研究分担者 |
松永 正訓 千葉大学, 医学部附属病院, 講師 (80302561)
吉田 英生 千葉大学, 大学院・医学研究院, 助教授 (60210712)
大沼 直躬 千葉大学, 大学院・医学研究院, 教授 (50125910)
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| 研究期間 (年度) |
2002 – 2005
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| 研究課題ステータス |
完了 (2005年度)
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| 配分額 *注記 |
3,600千円 (直接経費: 3,600千円)
2005年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
2004年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
2003年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
2002年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
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| キーワード | 横隔膜ヘルニア / 胎児治療 / VRGF / VEGF |
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| 研究概要 |
【方法】妊娠9.5日SDラットに、Nitrofen 100mgを経口投与する。胎仔ラットを摘出後、顕微鏡下でCDH形成の有無を確認。CDHを認めるものをCDH+群、CDH形成がないものをCDH-群とした。対照群は、オリーブオイルのみ経口させC群とした。各群とも妊娠17、19、21日に胎仔ラットを摘出し、以下の検討を行った。(1)肺動脈壁面積:21日胎仔肺のHE標本を作製し、マイクロアナライザーを用いて肺動脈の中膜+外膜の面積を求めた。(2)血管増殖因子:VEGFとレセプターであるFLK1のRNA発現量の変化をRT-PCRを用いて定量した。(3)angiopoietin-1(Ang-1), angiopoietin-2(Ang-2)とそのリセプター-であるTIE2、平滑筋増殖因子:PDGFbおよびレセプターであるPDGFbrのRNA発現量をRT-PCRを用いて定量した。
【結果】1.肺動脈壁面積は、C群、CDH-群に比べ、CDH+群で有意(p<0.0001)に肥厚を認め、この実験系がCDHモデルとして適正であることが証明された。
2.血管増殖因子:VEGFは、CDH-群ではGA17,19でC群と発現量の差はなく、GA21でC群に比べ有意に低発現であった。CDH+群では、GA17,19でCDH-群との差は認めなかったが、GA21でCDH-群において有意に発現が増加していた。しかし、C群と比較すると、CHD+群との発現量の差は認めなかった。FLK1の発現は、各群で有意差を認めなかった。
3.Ang-1は、C群、CDH-群で差を認めなかったが、CDH+群ではGA21で有意(p<0.005)に発現量が低下していた。Ang-2の発現は、各群間でのばらつきが大きく、明らかな有意差は認めなかった。TIE2の発現は、各群で差を認めなかった。PDGFb, PDGFbrは、各群間での差を認めなかった。
【研究成果】VEGFの発現量は、正常胎仔とCDH胎仔ラットでは発現量の差は認められず、従来考えられていたVEGFによるremodelingは出生後の肺高血圧により誘発され、胎児期のCDHにおける肺血管壁肥厚には関与していない可能性が示唆された。一方、CDHの存在により胎児期からAng-1の発現が抑制されることが分かった。このことから胎児期からCDHの存在により、血管構築に関わる遺伝子の発現量が変化していることが判明した。血管平滑筋増殖因子であるPDGFbは、CDH血管平滑筋肥厚には関与いていないことが分かった。
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