| 研究課題/領域番号 |
14580609
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
生物有機科学
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| 研究機関 | 京都工芸繊維大学 |
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研究代表者 |
村上 章 京都工芸繊維大学, 繊維学部, 教授 (60210001)
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| 研究分担者 |
岩瀬 礼子 京都工芸繊維大学, 繊維学部, 助手 (90283697)
山岡 哲二 京都工芸繊維大学, 繊維学部, 助教授 (50243126)
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| 研究期間 (年度) |
2002 – 2003
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| 研究課題ステータス |
完了 (2003年度)
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| 配分額 *注記 |
3,900千円 (直接経費: 3,900千円)
2003年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
2002年度: 2,600千円 (直接経費: 2,600千円)
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| キーワード | アンチセンス / 蛍光プローブ / ピレン / 遺伝子機能解析法 / トランスクリプトーム / 遺伝子診断 / 遺伝子破壊法 / 蛍光修飾RNAプローブ / アンチセンス法 |
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| 研究概要 |
アンチセンス遺伝子破壊法(以下アンチセンス法)は核酸化学に基づく新規概念の錐病治療法として70年代に提唱され、現在100件に及ぶ臨床試験が主に米国で実施されるに至っている。また、アンチセンス法は遺伝子機能解析法としての有用性も近年実証されてきており、核酸化学と生命科学とを結ぶ技術として定着しつつある。しかしながら、アンチセンス法に用いられるアンチセンス核酸の分子設計は未だに試行錯誤の域を出ておらず、その確立が強く求められている。本研究はこうした状況を背景に、蛍光法を基にした分子設計法の確立を行った。具体的にはRNA特異的に検出する蛍光性核酸プローブの開発に成功した。本プローブはRNAと結合したときにのみ蛍光強度を増加させる性質を持つことから、B/F分離を必要としないRNA検出プローブである。制御対象とするmRNAに本DNAプローブを添加しても蛍光強度に変化が見られない場合、プローブが対象とした配列にプローブは結合していないことを示し、その部位はアンチセンス核酸の対象として適していないことを示唆している。即ちこのプローブは対象mRNA上の、アンチセンス核酸の対象部位を検索するプローブとして極めて有効であることを示した。さらに、本プローブのリン酸結合部位を改変し、細胞透過性を高めたプローブの開発も実施し、細胞内における蛍光挙動が対象mRNAに依存し、かつ配列に依存することを確認している。このことは、本プローブが細胞内におけるmRNA検出にも有効であることを示し、アンチセンス核酸のより実際的分子設計に有効であるとともに、細胞内mRNA動態解析(トランスクリプトーム解析)、遺伝子診断にも有効であることを示した。このようなプローブは世界でも例を見ない独自性の高いものである。
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