| 研究課題/領域番号 |
14580736
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
神経化学・神経薬理学
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| 研究機関 | 群馬大学 |
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研究代表者 |
佐藤 幸市 群馬大学, 生体調節研究所, 助手 (00302498)
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| 研究分担者 |
岡島 史和 群馬大学, 生体調節研究所, 教授 (30142748)
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| 研究期間 (年度) |
2002 – 2003
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| 研究課題ステータス |
完了 (2003年度)
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| 配分額 *注記 |
3,600千円 (直接経費: 3,600千円)
2003年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
2002年度: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
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| キーワード | スフィンゴシン1-リン酸 / リゾフォスファチジン酸 / Edg / アストロ・グリア細胞 / FGF-2 / リポ蛋白質 / 神経細胞 / GTP結合蛋白質 / bFGF |
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| 研究概要 |
本研究では、(1)リポ蛋白質作用発現におけるS1P関与の証明、(2)ラット新生児アストロサイトからのリポ蛋白質の放出と連携したS1Pの産生応答を以下のように検討した。
(1)リポタンパク質作用発現におけるS1P関与の証明とそのシグナル伝達経路---(a)ラット新生児アストロサイトやC6細胞において、SIPがMAPキナーゼ(ERK)の活性化、Egr-1(転写因子)の発現を伴い、塩基性線維芽細胞成長因子(FGF-2)の発現を引き起こす。ヒト血漿から超遠心法により調製したリポ蛋白質によっても同様の応答が惹起された。これらの作用がS1Pを介していることの証明として、リポ蛋白質から脂質画分を抽出し、さらに、薄層クロマトグラフィーにより、S1P画分に活性があることを確認した。S1P受容体遺伝子を過剰発現させたC6細胞を作製し、リポ蛋白質による作用発現にS1P受容体が関与しているかどうか判定した。(b)PC12神経細胞ではS1PやLPAがRho活性化を介して神経突起退縮応答を引き起こす。実際、リポ蛋白質によっても神経突起退縮応答が惹起された。この作用にはリポ蛋白質に含まれるS1PまたはLPAが主要なメディエーターとして働くこと、Edg受容体/Rho/ROCK経路を介していること、また、リポ蛋白質の酸化状態の変化に伴い神経突起退縮応答をメディエートする脂質構成成分がS1PからLPA様物質に変化することが示唆された。
(2)リポタンパク質放出と連携したS1PとLPA放出応答の解析---(a)ラット新生児アストロサイトの無血清培養上清を回収し、S1PやLPA受容体を過剰発現させた細胞株を用いたバイオアッセイで脂質メディエーターの有無を検討した。その結果、培養条件を選択することで培養上清に分泌されるS1PやLPA様の活性を確認した。(b)アストロサイトの培養上清にアポEを含むリポ蛋白質が分泌される。超遠心法でリポ蛋白質を分離し脂質メディエーター様の応答を調べたところ、S1P様の活性がリポ蛋白質画分に、LPA様の活性がアルブミン画分に濃縮されていた。
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