| 研究課題/領域番号 |
14580800
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(C)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 応募区分 | 一般 |
|---|
| 研究分野 |
実験動物学
|
|---|
| 研究機関 | 長崎大学 |
|---|
研究代表者 |
大沢 一貴 長崎大学, 先導生命科学研究支援センター, 助教授 (90244756)
|
|---|
| 研究分担者 |
佐藤 浩 長崎大学, 先導生命科学研究支援センター, 教授 (50072947)
片峰 茂 長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (40161062)
近藤 宇史 長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (00158908)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2002 – 2003
|
| 研究課題ステータス |
完了 (2003年度)
|
| 配分額 *注記 |
3,600千円 (直接経費: 3,600千円)
2003年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
2002年度: 2,400千円 (直接経費: 2,400千円)
|
|---|
| キーワード | リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス / 診断用組換え抗原 / LCMV |
|---|
| 研究概要 |
国内でもある港湾地区のマウスからリンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス(LCMV)が分離され(OQ株)、プロトタイプであるWE株やArm株と遺伝子レベルでの比較検討がS遺伝子領域について行われてきた。OQ28株の塩基配列は、他の国内分離OQ株とは99%以上一致し、WE株と国内分離株とは大別されることが明らかとなった。そこで、日本国内においてLCMウイルスに感染したか否かを高感度、かつ特異的に診断するためには、国内分離株を用いた診断用抗原の作製の必要性が不可欠であると考え、国内分離株OQ28株を用いてタンパク発現を目指することとした。
1.発現用ベクター(pDsRed)に置換し、哺乳類細胞由来のCOS7細胞にトランスフォームした。OQ株のGp-2、Np-full、Np-Nend、Np-center Np-Cendを発現ベクターに置換し、トランスフォームの結果、Np-full、Np-Nend、Np-centerで赤色の蛍光を発する細胞を得たが、診断に耐えるだけの抗原量が得られなかった。
2.Np領域は、糖鎖による修飾を受けないため、大腸菌で発現させても抗原性を発揮する可能性が高いと考え、Np領域を3つに分割する断片をPCRによって作製し、それぞれの断片を発現用ベクターpGEX6P-1に置換した。大腸菌BL21にトランスフォームした後、シークエンスを行って3種類の断片が正確に発現ベクターに導入されていることを確認した。GSTを検出指標としたELISA法により、融合タンパク質の発現を確認した。しかしながら、現在一部の機関で応用されている昆虫細胞を用いた発現系に比べて、抗原との反応性および収量の点で、優れているものとはならなかった。
|
