| 研究課題/領域番号 |
14580804
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
実験動物学
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| 研究機関 | (財)癌研究会 |
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研究代表者 |
小林 敏之 財団法人癌研究会, 癌研究所・実験病理部, 研究員 (40260070)
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| 研究期間 (年度) |
2002 – 2003
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| 研究課題ステータス |
完了 (2003年度)
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| 配分額 *注記 |
3,500千円 (直接経費: 3,500千円)
2003年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
2002年度: 2,500千円 (直接経費: 2,500千円)
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| キーワード | Tsc2遺伝子 / tuberin / ノックアウトマウス / トランスジェニックEkerラット / 腎腫瘍 / 結節性硬化症 / S6キナーゼ / Erc / mesothelin |
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| 研究概要 |
Tsc2ノックアウトマウスより樹立したtuberin欠失腎腫瘍細胞(MKOC1-277)にtuberinを発現させた細胞株(T2株)の樹立を行った。空ベクターのみを導入した細胞株(E株)に比して、T2株においてはp70 S6キナーゼ(S6K)の活性が抑制されていることが明らかとなった。MKOC1-277はヌードマウスへの皮下移植で造腫瘍性を示すが、E株ではそれが保持されているものの、T2株では完全に抑制されることがわかった。またMKOC1-277の造腫瘍性はmTOR-S6K経路の抑制剤であるラパマイシン投与により、完全に抑制されることもわかった。これらの結果から、tuberinの機能の一つにはmTOR-S6K経路の抑制があり、その機能欠失が腫瘍増生に関わっていることが示唆された。また、TSc2欠失細胞で強発現するErc/mesothelin遺伝子がT2株では抑制されること、ラパマイシンではErcの抑制は認められないことがわかった。このことから、tuberinはS6Kとは異なる経路において機能を発揮することが予想された。Hela細胞に対するシグナル伝達阻害剤処理ではERCの発現は大きな変動を示さなかったものの、血清飢餓条件においてプロテアーゼ切断遊離型(約33kDa)ERC産物が増加する傾向を見出した。これらの結果から、Erc/ERCの発現・機能の制御にはmRNA量と共に蛋白レベルでの修飾が重要であり、Tsc2欠失によって何れかの機構に変化が生じているものと考えられた。またTuberinのRapl-GAP相同領域を含むC末端側約400アミノ酸残基をbaitとし、酵母two-hybrid法によりmyomegalinとγ2-adaptinをtuberin結合蛋白の候補として同定した。
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